Лабораторне заняття № 13

Тема: Вивчення імунологічних реакцій

Мета: Оволодіти методикою постановки імунологічної реакції,

встановити роль її складових.

Оснащення: комплемент (свіжий розчин), гемолізин, еритроцити барана і ВРХ, водяна баня, термостат.

Дослід 1. Вивчити роль компонентів імунологічної реакції

Гемолізу

Хід досліду: В три пробірки окремими піпетками внести компоненти імунологічної реакції згідно таблички:

№ з/п проб.	Еритроцити (2,5 % сусп.)	Гемолізін 1:750	Комплемент 1:20	Фіз. Розч.	Наявність гемолізу
11. 22. 3.	0,5 0,5 0,5 0,5	0,5 0,5 -	0,5 - 0,5	- 0,5 0,5

Вміст пробірок перемішати і поставити на 30 хвилин в термостат при температурі 38° С.

Через ЗО хвилин пробірки вийняти з термостата і прочитати реакції. Повний гемоліз позначити +++, неповний ++, або +, відсутність гемолізу -.

Занести дані у зошит, зробити пояснення.

Дослід 2. Вивчити специфічність імунологічної реакції

Хід досліду: У дві пробірки внести по 0,5 мл гемолізіну і комплементу в робочих розчинах. В пробірку № 1 добавити 0,5 мл суспензії еритроцитів барана, а в пробірку № 2 - суспензії еритроцитів ВРХ.

Перемішати вміст пробірок і поставити в термостат на 30 хвилин при температурі 38 С.

Через ЗО хвилин прочитати реакцію. Звернути увагу на те, що в одній пробірці пройшла реакція гемолізу, а у другій вона відсутня. Записати пояснення.

Дослід 3. Вивчити стійкість імуноглобуліна і комплемента до

Температури

Хід досліду: В пробірку № 1 внести 0,5 мл гемолізіну, а в пробірку № 2 комплемент (робочий розчин) і помістити у водяну баню на 20 хвилин при температурі 56°С.

Пробірка № 3 є контролем. В усі пробірки внести компоненти імунологічної реакції згідно з табличкою, перемішати і поставити на ЗО хвилин в термостат при температурі 38°С.

Через 30 хвилин прочитати реакцію. Звернути увагу на те, в якій пробірці не відбувся гемоліз. Дати пояснення.

№ п/п	Еритроцити	Гемолізін	Комплемент	Наявність гемолізу
11. 2. 3.	0,5 0,5 0,5	0,5 Т 56 °С 0,5 0,5	0,5 0,5 Т 56 °С 0,5

Дослід 4. Вивчити явища адсорбції антитіла (гемолізіну) на поверхні антигена (еритроцитів) (Дослід Даниша)

Хід досліду: В пробірку № 1 внести повний набір компонентів: Е - 0,5; Г - 0,5; К - 0,5. В пробірку № 2 - Е - 0,25; Г - 0,5; К - 0,5. Перемішати вміст пробірок і поставити в термостат на ЗО хвилин при температурі 38 С. Через 30 хвилин вийняти пробірки з термостата і відмітити реакції. Після цього в пробірку № 2 внести решту 0,25 мл еритроцитів і знову поставити пробірки в термостат. Через ЗО хвилин пробірки вийняти і прочитати реакцію.

Звернути увагу на те, що добавка антигену частками до антитіла не викликає подальшого гемолізу, так як імунна реакція не йде по типу кратних співвідношень, а на її першому етапі відбува­ється адсорбція всіх імуноглобулінів антитіла на поверхні антигена.