- •Биологическая химия и молекулярная биология Руководство к лабораторным работам
- •Содержание
- •Рабочая программа курса «биохимия и молекулярная биология»
- •Техника безопасности при работе в биохимической лаборатории
- •Часть 1 Раздел 1 Углеводы
- •Открытие углеводов в растворах
- •2. Восстанавливающие свойства углеводов
- •1.3. Полисахариды Работа 6. Кислотный гидролиз крахмала
- •Работа 7. Выделение гликогена из печени
- •Раздел 2. Липиды
- •Работа 8. Определение кислотного числа
- •Работа 9. Определение числа омыления
- •Работа 11. Качественные реакции на обнаружение витамина е
- •Работа 12. Качественные реакции на ацетон и ацетоуксусную кислоту
- •Раздел 3 Белки
- •3.1. Химическая природа белка (цветные реакции)
- •3. 2. Физико-химические свойства белка
- •3.2.1. Реакции осаждения белков
- •3.2.2. Растворимость белков
- •Высаливание белков
- •3.2.4. Определение изоэлектрической точки белков
- •3. 3. Гидролиз белков
- •Качественные реакции на открытие составных частей сложных белков
- •Раздел 4 Нуклеотиды
- •Работа 29. Исследование состава нуклеиновых кислот
- •Раздел 5. Витамины
- •Работа 30. Количественное определение аскорбиновой кислоты
- •Работа 31. Количественное определение витамина р в чае
- •Контрольные вопросы
- •Раздел 6. Ферменты
- •6.1. Влияние температуры на скорость ферментативной реакции
- •Работа 32. Влияние температуры на активность амилазы слюны
- •Влияние температуры на активность амилазы слюны
- •Влияние температуры на активность холинэстерзы
- •6.2. Влияние рН на скорость ферментативных реакций
- •Работа 34. Влияние рН на активность амилазы слюны
- •Влияние рН на активность амилазы слюны
- •6.3. Специфичность действия ферментов
- •Работа 35. Специфичность действия α-амилазы слюны
- •Работа 36. Специфичность действия сахаразы
- •6.4. Открытие ферментов различных классов
- •Работа 37. Идентификация оксидоредуктаз в биологическом материале
- •Буферные растворы
- •Фосфатный буфер (0,1м), рН 5,8-8,0
- •Бикарбонатный буфер (0,1 м), рН 9,2-10,8
- •Трис-буфер (0,05 м), рН 7,2-9,1
- •Раздел 2. Обмен углеводов
- •Работа 43. Количественное определение углеводов
- •Определение содержания глюкозы в сыворотке крови энзиматическим методом
- •Работа 44. Влияние инсулина на содержание глюкозы в крови
- •Работа 45. Влияние адреналина на содержание глюкозы в крови
- •Работа 46. Определение гликолитической активности эритроцитов
- •Работа 47. Количественное определение содержания гликогена в печени и скелетных мышцах крысы
- •Раздел 3. Биоэнергетика
- •Работа 48. Сравнительное изучение активности сукцинатдегидрогеназы в различных тканях крыс и ее конкурентное торможение
- •Работа 49. Количественное определение макроэргических соединений в мышцах (атр и креатинфосфата)
- •Контрольные вопросы
- •Раздел 4. Обмен липидов Работа 50. Исследование действия липазы поджелудочной железы.
- •Работа 51. Определение общих липидов в сыворотке крови
- •Работа 52. Количественное определение липопротеинов низкой плотности (лпнп) в сыворотке крови
- •Работа 53. Определение общего холестерина в сыворотке крови, основанное на реакции Либермана-Бурхарда (метод Илька)
- •Работа 54. Определение общих фосфолипидов в плазме крови
- •Раздел 5. Обмен нуклеиновых кислот
- •Работа 55. Спектрофотометрическое определение суммарного содержания нуклеиновых кислот
- •Работа 56. Определение температуры «плавления» водородных связей
- •Работа 57. Определение содержания мочевой кислоты
- •Работа 58. Определение активности рибонуклеазы
- •Раздел 6. Обмен белков и аминокислот Работа 59. Количественное определение белка
- •1. Биуретовый метод
- •2. Микробиуретовый метод
- •3. Метод Брэдфорд
- •4. Спектрофотометричекий метод
- •Работа 60. Определение концентрации мочевины в сыворотке крови и моче
- •Работа 61. Определение активности аргиназы печени
- •Работа 62. Количественное определение креатинина в моче и сыворотке крови
- •Работа 63. Определение активности аланинаминотрасферазы и аспартатаминотрасферазы
- •Работа 64. Переаминирование аминокислот
- •Работа 65. Оценка биосинтетической функции ткани по соотношению рнк и днк к белку
Буферные растворы
Ацетатный буфер (0,2 М), рН 3,6-5,8
Ацетат натрия *3Н20, масса 136,09
рН (18С) |
CH3COONa (0,2М), мл |
CH3COOH (0,2М), мл |
рН (18С) |
CH3COONa (0,2М), мл |
CH3COOH (0,2М), мл |
3,6 |
0,75 |
9,25 |
4,8 |
5,90 |
4,10 |
3,8 |
1,20 |
8,80 |
5,0 |
7,00 |
3,00 |
4,0 |
1,80 |
8,20 |
5,2 |
7,90 |
2,10 |
4,2 |
2,65 |
7,35 |
5,4 |
8,60 |
1,40 |
4,4 |
3,70 |
6,30 |
5,6 |
9,10 |
0,90 |
4,6 |
4,90 |
5,10 |
5,8 |
9,40 |
0,60 |
Фосфатный буфер (0,1м), рН 5,8-8,0
Двузамещенный фосфат натрия, Na2HPO4*2H2O, мол.масса = 178,05
Двузамещенный фосфат натрия, Na2HPO4*12H2O, мол.масса = 358,22
Однозамещенный фосфат натрия, NaH2PO4*H2O, мол.масса = 138,0
Однозамещенный фосфат натрия, NaH2PO4*2H2O, мол.масса = 156,03
рН |
Na2HPO4 (0,2 М), мл |
NaH2PO4* (0,2 М), мл |
Вода, мл |
рН |
Na2HPO4 (0,2 М), мл |
NaH2PO4* (0,2 М), мл |
Вода, мл |
5,8 |
8,0 |
92,0 |
До 200 |
7,0 |
61,0 |
39,0 |
До 200 |
6,0 |
12,3 |
87,7 |
» 200 |
7,2 |
72,0 |
28,0 |
» 200 |
6,2 |
18,5 |
81,5 |
» 200 |
7,4 |
81,0 |
19,0 |
» 200 |
6,4 |
26,5 |
73,5 |
» 200 |
7,6 |
87,0 |
13,0 |
» 200 |
6,6 |
37,5 |
62,5 |
» 200 |
7,8 |
91,5 |
8,5 |
» 200 |
6,8 |
49,0 |
51,0 |
» 200 |
8,0 |
94,7 |
5,3 |
» 200 |
Бикарбонатный буфер (0,1 м), рН 9,2-10,8
Этот буфер не может быть использован, если в среде присутствуют ионы кальция или магния.
Карбонат натрия (Na2CO3*10H2O), мол.масса = 286,2
Бикарбонат натрия NaHCO3, мол.масса = 84,0
рН при |
Na2CO3 (0,1 М), мл |
NaHCO3, (0,1 М), мл |
рН при |
Na2CO3 (0,1 М), мл |
NaHCO3, (0,1 М), мл |
||
20С |
37С |
20С |
37С |
||||
9,16 |
8,77 |
1 |
9 |
10,14 |
9,90 |
6 |
4 |
9,40 |
9,12 |
2 |
8 |
10,28 |
10,08 |
7 |
3 |
9,51 |
9,40 |
3 |
7 |
10,53 |
10,28 |
8 |
2 |
9,78 |
9,50 |
4 |
6 |
10,83 |
10,57 |
9 |
1 |
9,90 |
9,72 |
5 |
5 |
|
|
|
|