Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
BAD_lab.doc
Скачиваний:
25
Добавлен:
03.05.2019
Размер:
453.63 Кб
Скачать

1.4. Резорциновий метод визначення кетоз

В основу методу покладена реакція Селиванова, що протікає у сильно кислому середовищі. При цьому з фруктози утворюється оксиметилфурфурол.

Вступаючи у реакцію з резорцином, оксиметилфурфурол утворює комплексну сполуку з інтенсивним вишнево-червоним забарвленням.

З альдегідами реакція з резорцином протікає дуже повільно, що дозволяє визначити фруктозу в присутності глюкози.

Інтенсивність забарвлення розчину комплексону прямо пропорційна вмісту оксиметилфурфуролу, а , отже, і фруктозі. Інтенсивність забарвленості вимірюють за допомогою фотоелектроколориметра, а далі враховуючи значення оптичної густини, за калібрувальним графіком знаходять вміст фруктози у сфері реакції.

Метод відзначається високою чутливістю і дає можливість визначити наявність як фруктози, так і сахарози у дуже незначних кількостях (10 мкг у сфері реакції).

Хід роботи

Побудова калібрувального графіку. Для приготування стандартного розчину фруктози на аналітичних вагах зважують 0,16 г фруктози, яку без втрат переносять у мірну колбу об'ємом 100 см3.

Вміст колби доводять водою до мітки, перемішують і фільтрують. Перші 20 мл фільтрату відкидають.

Із фільтрату, який містить 1,60 мг фруктози в 1 см3, готують розчини для колориметрування наступних концентрацій ( в мг/мл): 1,2; 0,8; 0,4. Для цього в мірні колби на 25 см3 із бюретки відміряють 18,5; 12,5 та 6,5 см3 стандартного розчину, доливають дистильованою водою до мітки і перемішують.

З кожної колби, включаючи і стандартний розчин, відбирають по 0,5 см3 розчину фруктози в сухі градуйовані на об'єм 8 см3 пробірки для проведення реакції утворення комплексону. В одній пробірці готують “холостий” дослід, в якому замість розчину фруктози використовують 0,5 мл дистильованої води. Таким чином, у приготованій серії розчинів вміст фруктози складає 800; 600; 400; 200 мкг. Потім у кожну пробірку додають по 2 см3 0,25%-ного розчину резорцину у 20%-ній соляній кислоті (відмірюємо циліндром). Вміст пробірок швидко перемішують круговими рухами, пробірки закривають пробками з повітряними холодильниками, ставлять у штатив, який поміщають у киплячу водяну баню. рівень води у бані повинен бути на 1-2 см вище рівня рідини у пробірках. Через 10 хв. від початку занурення пробірок у воду штатив виймають і швидко охолоджують пробірки під струменем води до 20 0С. після охолодження пробірки залишають у спокої протягом 1 год. для стабілізації кольору.

Безпосередньо перед колориметруванням об'єм розчину у пробірках доводимо до 8 см3. Колориметрування проводять при λ=400 нм в кюветі з довжиною граней 5 мм. В якості розчину порівняння використовують “холосту” пробу. Колориметричну реакцію для кожного розчину повторюють не менше трьох разів. Відхилення значень оптичної густини при вимірюваннях не повинна перевищувати 0,003-0,004 D. За значення оптичної густини приймають середнє арифметичне значення з повторних вимірювань.

Калібрувальний графік будують на міліметровому папері, відкладаючи по осі абсцис вміст фруктози, а по осі ординат величину оптичної густини.

Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]