Подготовка проб

Важным условием получения ИК-спектров является отсутствие влаги в анализируемом образце. Испытуемое вещество или препа­рат тщательно измельчают в агатовой ступке. Обычную ступку нельзя использовать, поскольку в ней имеются поры, в которых со­держится вода. Затем полученный порошок необходимо поместить в среду, хорошо пропускающую ИК-излучение. Для этого обычно используют:

1. прессование испытуемого порошка с измельченным калия бромидом — получение таблеток,

2. растирание испытуемого порошка с минеральным (вазелино­вым) маслом — получение пасты.

Калия бромид не имеет полос поглощения в области 4000—400 см^-1. Масло вазелиновое имеет в этом диапазоне ряд полос, однако это не существенно для интерпретации спектров..

Если анализируется лекарственная субстанция, для анализа берут испытуемую навеску массой около 15 мг (0,015 г).

При анализе таблеток содержание действующего вещества в пробе должно быть около 5 мг (0,005 г). Остальная часть — это вспомога­тельные вещества. При таком соотношении на спектре прослежива­ются полосы лекарственного вещества, а полосы вспомогательных веществ либо отсутствуют, либо немногочисленны и имеют неболь­шую интенсивность. Тем не менее, для большей надежности при ин­терпретации спектров в приложении приведены не только спектры субстанций, но и лекарственных препаратов.

Небольшое количество полученной пасты помещают стеклян­ной палочкой между двумя стеклами из калия бромида, которые, в свою очередь, зажимают в специальном устройстве (кювете). Кювету помещают в измерительный отсек прибора и получают ИК-спектр.

Для получения надежных результатов рекомендуется снимать фоновый спектр (спектр воздуха) непосредственно перед каждым измерением. Это, во-первых, связано с колебаниями влажности, во-вторых, с изменением газового состава в измерительном отсеке (двухатомные молекулы N₂, 0₂ не имеют ИК-спектров, однако С0₂ поглощает ИК-изучение) и, в третьих, с постепенным «прогревом» прибора после его включения.

Интерпретация спектров

Инфракрасный спектр испытуемого образца должен иметь полное совпадение полос поглощения с полосами поглощения прилагаемого спектра сравнения по положению и относительным интенсивностям.

Однако в настоящее время при интерпретации ИК-спектров не­обходимо учитывать ряд факторов. Современные ИК-спектрофотометры имеют достаточно большую чувствительность и управляются серьезным программным обеспечением. Полученные спектры также анализируются с помощью этих компьютерных программ, а не рису­ются относительно грубо с помощью самописца. Это позволяет ви­деть на рисунке полосы поглощения практически любой интенсив­ности — вплоть до 0,5 % по шкале пропускания (transmittance). Высокое разрешение современных приборов (в данном случае 1 см^-1) дает возможность разделить находящиеся рядом полосы..

Поэтому в случае ИК-спектроскопии (особенно при получе­нии спектров таблеток, где имеется побочное действие вспомога­тельных веществ) добиться полного (100%) совпадения полос даже для подлинного (нефальсифицированного) препарата не всегда удается.

Поэтому при интерпретации спектров важно чтобы все полосы большой, средней и малой интенсивности имели полное совпадение с соответствующими полосами стандартного спектра. Исчезновение полос очень малой интенсивности (1—2 % по шкале пропускания), а также слияние полос, находящихся друг от друга на рас­стоянии менее 6—8 см-¹, не свидетельствует о факте подделки.

хроматогрАфия (ОФС 42-0092-09)

Хроматографией называется физико-химический метод разделения смесей, в котором разделяемые компоненты распределены между двумя фазами. одна из этих фаз (стационарная фаза) неподвижна, а другая (подвижная фаза) постоянно движется в определенном направлении.

по свойствам подвижной и неподвижной фаз хроматографические методы можно разделить на следующие типы, показанные на схеме (рис. 10).

Рисунок 10. Типы хроматографии

Результат хроматографического разделения представляется в виде хроматограммы.