Способы элюирования

Используют следующие способы элюирования: восходящее элюирование (одно- и многоступенчатое, одномерное и двумерное – с поворотом пластинки на 90° или 180°) и горизонтальное.

Наиболее распространенным является восходящее элюирование (хроматографирование). Для осуществления этого вида ТСХ элюент наливают на дно хроматографической камеры, а нижний край пластины помещают в растворитель. Фронт элюента при этом перемещается снизу вверх.

Восходящая хроматография

Если не указано иначе в частной фармакопейной статье, пластинку с нанесенными пробами помещают вертикально в камеру, предварительно насыщенную парами ПФ в течение 1 ч при 20–25 °С. уровень ПФ должен быть расположен ниже линии старта. Камеру закрывают и проводят процесс при 20–25 °С в защищенном от света месте. После прохождения фронта ПФ расстояния, указанного в частной фармакопейной статье, пластинку вынимают из камеры, сушат и проявляют в предписанных условиях.

При проведении двумерной хроматографии пластинку высушивают после хроматографирования в первом направлении и хроматографируют в направлении, перпендикулярном первому.

Способы обнаружения

Обнаружение (детектирование) хроматографических зон после проведения качественной и полуколичественной ТСХ осуществляют следующими способами:

– наблюдением под УФ-светом;

– опрыскиванием растворами обнаруживающих реагентов;

– выдерживанием в парах обнаруживающего реагента;

– погружением в растворы обнаруживающих реагентов в специальных камерах.

Техника эксперимента в тсх

На поверхности пластины осторожно, чтобы не повредить слой сорбента, намечают (например, карандашом) линию старта и линию финиша. На линию старта наносят (микрошприцем) пробу раствора испытуемого препарата и рядом пробу раствора сравне­ния. Пробы испытуемого раствора и раствора сравнения наносят на линию старта с помощью микрошприца, осторожно касаясь слоя сорбента.

При нанесении проб надо стремиться получать компактные «стартовые пятна» диаметром не более 4—5 мм, что повышает эффективность и четкость разделения. Для этого можно использо­вать дробное нанесение (по частям) с применением нагревательного устройства для сушки пластин.

Примечание. Перед нанесением, между нанесениями, а также после нанесения проб микрошприц необходимо тщательно промы­вать в метиловом или этиловом спирте не менее 5 раз для предотвра­щения его загрязнения и смешения проб между собой.

Раствор сравнения содержит образец искомого действующего вещества. После нанесения проб дают возможность испариться растворителю с поверхности пластины, после чего нижний край пластины (то есть со стороны линии старта) помещают в ПФ, за­полняющую дно хроматографической камеры. ПФ представляет собой специально подобранный для конкретного случая раствори­тель или смесь растворителей. Под действием капиллярных сил ПФ самопроизвольно перемещается вдоль пластины от стартовой линии до линии финиша, увлекая за собой лекарственные вещества, содержащиеся в пробах. После достижения ПФ линии финиша хроматографирование прерывают, извлекая пластину из хромато графической камеры. Пластину высушивают и определяют поло­жение пятен веществ на ее поверхности путем облучения пластины в УФ-камере.

Рисунок 12.

Если пятно, полученное от испытуемого раствора, находится на одном уровне с пятном от раствора сравнения, это с большой веро­ятностью означает, что данные растворы содержат одно и то же действующее вещество и это свидетельствует о подлинности испы­туемого лекарственного препарата (А). Если же пятно от испы­туемого раствора значительно отличается по положению от пятна раствора сравнения или вообще отсутствует, то это значит, что испытуемый препарат недоброкачественный или фальсифи­цированный (Б) (рис. 12).