Created for http://www.uapf.com.ua

5.1. Загальні тексти з мікробіології

5.1.ЗАГАЛЬНІ ТЕКСТИ З МІКРОБІОЛОГІЇ

5.1.3.ЕФЕКТИВНІСТЬ АНТИМІКРОБНИХ КОНСЕРВАНТІВ

Якщо готовий лікарський засіб сам по собі не має достатньої антимікробної активності, до його складу можуть бути уведені антимікробні консерванти, що особливо важливо для лікарських засобів у вигляді водних розчинів. Оскільки мікробне забруднення може викликати інфікування пацієнта або псування готового лікарського засобу, антимікробні консерванти призначені для запобігання розмноженню мікроорганізмів або обмеження мікробної забрудненості готового лікарського засобу в процесі зберігання і застосування, особливо у випадку використання багатодозових упаковок. Антимікробні консерванти не мають використовуватися як альтернатива належній виробничій практиці.

Ефективність антимікробного консерванта може посилюватися або послаблюватися в результаті взаємодії з діючою речовиною або іншими компонентами готового лікарського засобу, а також з пакувальними або закупорювальними матеріалами. Тому протягом терміну придатності треба контролювати антимікробну активність готового лікарського засобу, що зберігається у контейнері, з метою доказу того, що вона не знижується у процесі зберігання. Для такого контролю можуть бути використані зразки, добуті з контейнера безпосередньо перед випробуванням.

На стадії розробки лікарського засобу треба довести, що антимікробна активність самого лікарського засобу або при необхідності лікарського засобу з добавкою придатного консерванта(ів) забезпечує належний захист від небажаних ефектів, які можуть бути результатом мікробного забруднення лікарського засобу або розмноження в ньому мікроорганізмів у процесі зберігання і використання.

Випробування ефективності антимікробних консервантів може бути проведене, як описано нижче. Дане випробування не призначене для рутинного контролю.

ВИПРОБУВАННЯ ЕФЕКТИВНОСТІ АНТИМІКРОБНИХ КОНСЕРВАНТІВ

Для проведення випробування у готовий лікарський засіб, що знаходиться по можливості у контейнері, вносять зазначену нижче кількість придатних тестмікроорганізмів і зберігають інокульовані зразки при зазначеній нижче температурі. Через певні проміжки часу з інокульованих зразків відбирають проби і визначають в них число мікроорганізмів.

Ефективність консерванті в у готовому лікарському засобі вважають задовільною, якщо за умов прове-

дення випробування, при зберіганні інокульованих зразків при заданій температурі, протягом зазначених проміжків часу спостерігається значне зменшення або не спостерігається збільшення, у залежності від вимогдо готового лікарського засобу, числа мікроорганізмів. Критерії оцінки, що показують зменшення числа мікроорганізмів за певний період часу, залежать від потрібного ступеня захисту готових лікарських засобів (див. Таблицю 5.1.3.-1/2/3).

Теет-мікроорганізми
Pseudomonas	ATCC 9027; NCIMB 8626; CIP	і
aeruginosa	82.118.

Staphylococcus ATCC 6538; NCTC 10788; NCIMB ! aureus 9518; CIP 4.83.

Candida albicans ATCC 10231; NCPF 3179; IP 48.72. і

Aspergillus	ATCC 16404; IMI 149007; IP 1431.83.
rbrasiliensisA

При випробуванні використовують монокультури перелічених мікроорганізмів. Якщо необхідно, використовують також мікроорганізми, які можуть являти ймовірне мікробне забруднення готового лікарського засобу. Наприклад, при випробуванні усіх готових лікарських засобів для орального застосування рекомендується використовувати Escherichia coli (АТСС 8739; NCIMB 8545; СІР 53. 126), а при випробуванні готовихлікарських засобів для орального застосування, що містять високі концентрації цукру, — Zygosaccharomyces rouxii (NCYC 381; IP 2021.92).

Приготування інокуляту

При підготовці до проведення випробування свіжовирощену вихідну культуру кожного із зазначених тест-мікроорганізмів г пересівають на поверхню густого соєво-казеїнового живильного середовища (2.6.12) у разі вирощування бактерій або густого живильного Сабуро-декстрозного середовища без додавання антибіотиків (2 6.12) у разі вирощування грибів, А Культури бактерій інкубують при температурі від ЗО °С до 35 °С від 18 год до 24 год; культуру С. albicans інкубують при температурі від 20 °С до 25 °С протягом 48 год; культуру A. rbrasiliensis л - при температурі від 20 °С до 25 °С протягом одного тижня або до одержання добре розвинутих спор. Для досягнення мікроорганізмом його оптимального стану можуть бути потрібні пересівання, однак рекомендується обмежитися мінімально можливим їх числом.

Для приготування суспензій бактеріальних культур і культури С. albicans мікробну масу змивають з поверхні живильного середовища стерильною суспендуючою рідиною, що містить 9 r/л натріюхюриду Р і переносять у придатну посудину. Потім за допомогою тієї самої рідини доводять вміст мікроорганізмів до 10s КУО у мілілітрі. Для приготування суспензії культури .4. rbrasiliensis л використовують

ДЕРЖАВНА ФАРМАКОПЕЯ УКРАЇНИ 1.4

169

Created for http://www.uapf.com.ua

5.1. Загальні тексти з мікробіології

стерильну суспендуючу рідмну, що містить 9 г/л натрію хюриду Рі 0.5 г/л по.іісорбату-SO Р, і за її допомогою доводять вміст спор до ! 0s КУОу мілілітрі.

З кожної суспензії негайно відбирають придатний зразок і визначають число колонієутворюючих одиниць у І мл кожної суспензії методом прямого висівання на чашки або методом мембранної фільтрації (2.6.12). Одержане значення правитьдля визначення числа життєздатних мікроорганізмів в інокуляті і вихідного числа мікроорганізмів при проведенні випробування. Інокулят треба використовувати негайно після приготування.

Таблиця 5.1.3.-1.

Г Парентеральні

лікарські

засоби, очні лікарські

засоби,

інтраурстралмі

та інтрамаммолярні лікарські

засоби А.

і

— '

,

'

і

Lg зменшення

і

j

_

І

6 год

] 24 гол "У 7 діб

[

14

дір j 28 діб\

•

Бактерії 1 A j

2

|

3_ j

-

-

j

НВ

і

[

_

в Г ~

і Х І - І І І Г -

і

н з - 1

і

Гриби І

А і

-

:

(_

2_

і

нз

і

Iв f- --• —{ _—І

.

I

t

І НЗ І

НВ — мікроорганізми не виявляються НЗ — гне спостерігається збільшення числа мікроорга-

нізмів у порівнянні з кількістю життєздатних мікроорганізмів у попередній контрольній точці. А

МЕТОДИКА

Для підрахунку життєздатних мікроорганізмів у інокульованих зразках використовують те саме густе живильне середовище, яке було використане для початкового вирощування відповідних мікроорганізмів.

Кожний контейнер з випробовуваним лікарським засобом інокулюють суспензією, що містить один з тест-мікроорганізмів, забезпечуючи мікробне навантаження від І О5 до 106 КУО у мілілітрі або грамі лікарського засобу. Об'єм інокуляту має складати не більше 1 % від об'єму зразка. Ретельно перемішують для забезпечення рівномірного розподілу мікроорганізмів у зразку.

Інокульовані зразки лікарського засобу витримують при температурі від 20 °С до 25 °С у захищеному від світла місці. З кожного випробовуваного зразка відбирають проби (звичайно 1 мл або 1 г) безпосередньо після інокуляції і через зазначені інтервали часу, що залежить від типу лікарського засобу визначають число життєздатних мікроорганізмів методом висівання на чашки або методом мембранної фільтрації (2.6.12). Антимікробну активність готового лікарського засобу треба усунути шляхом розведення. фільтрації або за допомогою придатного інактиватора. При використанні процедури розведення треба брати до уваги зниження чутливості методу при визначенні малого числа життєздатних мікроорганізмів. При використанні інактиватора треба підтвердити шляхом контрольних дослідів, що його присутність не впливає на життєздатність мікроорганізмів. Треба підтвердити придатність методики для доказу потрібного зменшення числа життєздатних мікроорганізмів.

КРИТЕРІЇ ПРИЙНЯТНОСТІ ЕФЕКТИВНОСТІ АНТИМІКРОБНИХ КОНСЕРВАНТІВ

У Табл. 5.1.3.-1/2/3 подані критерії оцінки антимікробної активності у вигляді логарифма зменшення числа життєздатних мікроорганізмів по відношенню до визначеного вихідного числа мікроорганізмів.

Критерій А відповідає рекомендованій ефективності. Якщо обґрунтовано, що критерій А не може бути досягнутий, наприклад, з причини підвищеного ризику несприятливих впливів, лікарський засіб має задовольняти критерію В.

Таблиця 5.1.3.-2.

VВушні лікарські засоби, назальнілікарські засоби, лікарські засоби для зовнішнього застосування та лікарські засоби для інгаляційА

		Lg зменшення			14 діб	28 діб
Бактерії	|	2 діб	і	7 діб
	А і	2	!	3	-	НЗ
	В		І		3	НЗ
			і
Гриби	А;				2	НЗ
	ІВ|	-	і	-	1	НЗ І

ГНЗ — не спостерігається збільшення числа мікроорганізмів у порівнянні з кількістю життєздатних мікроорганізмів у попередній контрольній точці. А

Критерій А відповідає рекомендованій ефективності. Якщо обгрунтовано, що критерій А не може бути досягнутий, наприклад, з причини підвищеного ризику несприятливих впливів, лікарський засіб має задовольняти критерію В.

Таблиця 5.1.3.-3. wЛікарські засоби для орального застосування, оромукозні

та лікарські засоби дляректального застосуванняА

	Lg зменшення	28 діб
	14 діб
Бактерії	3	НЗ
Гриби	1	НЗ

гНЗ — не спостерігається збільшення числа мікроорганізмів у порівнянні з кількістю життєздатних мікроорганізмів у попередній контрольній точці. А

Наведені критерії відповідають рекомендованій ефективності.

Д'

Випробування ефективності антимікробних консервантів

170	ДЕРЖАВНА ФАРМАКОПЕЯ УКРАЇНИ 1.4 170

Created for http://www.uapf.com.ua

		5.1. Загальні тексти з мікробіології
	Тест-мікроорганізми. При випробуванні ефективності	цього, негативно впливати на здоров'я пацієнтів.
	антимікробних консервантів можуть бути також ви-	Тому виробники мають забезпечити низький рівень
	користані такі штами тест-мікроорганізмів:	біологічного забруднення готових дозованих форм
	Замість тест-мікроорганізму Escherichia соїі	шляхом виконання поточних директив належної
	АТСС 8739 (NCIMB 8545; СІР 53.126) може бути	виробничої практики (НВП, GMP) під час вироб-
	використаний тест-мікроорганізм Escherichia соїі	ництва, пакування, зберігання та розповсюдження
	УКМ В-906 (АТСС 25922).	лікарських засобів.
	Замість тест-мікроорганізму Candida albicans АТСС	Випробування мікробіологічної чистоти нестериль-
	10231 (NCPF 3179; IP48.72) може бути використаний	них лікарських засобів проводять згідно методів, на-
	тест-мікроорганізм Candida albicans УКМ Y-1918	ведених в статтях (2 6.12) та (2.6.13). Для нестериль-
	(АТСС 885-653; ГИСК259).	них лікарських засобів критерії прийнятності, що
	Допускається використання інших штамів мікро-	базуються на загальному числі аеробних мікроор-
		ганізмів (ТАМС) та загальному числі дріжджевих та
	організмів із узгодження з компетентним уповно-
		плісеневих грибів (TYMC), наведені в Табл.5.1.4,-1,
	важеним органом.
		5.1.4.-2. Крітерії прийнятності грунтуються на ре-
		зультатах одного випробування, або на середньому
	Г5.1.4. МІКРОБІОЛОГІЧНА ЧИСТОТА	результаті декількох повторних випробувань (на-
		приклад, при випробуванні методом прямого ви-
	НЕСТЕРИЛЬНИХ ЛІКАРСЬКИХ ЗАСОБІВ	сівання на чашки Петрі).
	Присутність деяких мікроорганізмів в нестерильних	Якщо крітерії прийнятності мікробіологічної чисто-
	лікарських засобах може викликати зменшення або	ти визначені в окремій етапі, результати інтерпре-
	навіть інактивацію їх терапевтичної дії та, внаслідок	тують наступним чином:
		Таблица 5.1.4.-1.

Критеріїприйнятностімікробіологічноїчистоти готових нестерильнихлікарськихзасобів

Шлях введення

Не водні лікарські засоби для орального застосування

Водні лікарські засоби для орального застосування

Для ректального застосування

Оромукозні лікарські засоби) Для ясен Для зовнішнього застосування

Для назального застосування Вушні лікарські засоби

Для вагінального застосування

ТАМС	TYMC	Окремі види мікроорганізмів
КУО/r або КУО/мл КУО/г або КУО/мл
105	102	Відсутність Escherichia соїі
		в 1 г або 1 мл
іо2	10і	Відсутність Escherichia соїі
103	ю2	вігабо Імл
		•
102	10і	Відсутність Staphylococcus aureus
		в 1г або 1 мл
		Відсутність Pseudomonasaeruginosa
		в 1 г або 1 мл
іо2	10і	Відсутність Staphylococcus aureus

в 1г або 1 мл Відсутність Pseudomonas aeruginosa

в 1 г або 1 мл

Відсутність Candida albicans в 1 габо 1 мл;

Трансдермальні пластирі (норми для одного пластиря, включаючи липкий шар та основу)

Для інгаляидй (до рідких засобів для розпилення застосовують спеціальні вимоги)

• Спеціальні вимоги Фармакопей до готових лікарських засобів для

! орального застосування, що містять

ісировину природного (тваринного,

\рослинного або мінерального)

1 походження, для яких попередня і антимікробна обробка неможлива, | та для якихуповноважений

j компетентний орган допускає в

j сировині ТАМС більше за КУО в 1 І г або / МЛ) •

Ю2	10і	Відсутність Staphylococcus aureus
		на 1 пластир
		Відсутність Pseudomonas aeruginosa
		на 1 пластир
102	10і	Відсущість Staphylococcus aureus
		вігабоїмд
		Відсутність Pseudomonas aeruginosa	і
		в 1 габо 1 мл
		Відсутність толерантних до жовчі
		грашкгадгивнщ бактерій в 1 г або 1 ші
ІО4	102	Не більше 10і КУО толерантних до жовчі

грамнегативних бактерій в 1 г або 1 мл і Відсутність Salmonella в 10 г або 10 мл Відсутність Escherichia соїі в 1 г або 1 мд Відсутність Staphylococcus emeus

вігаооїмд

—: _

І

171 ДЕРЖАВНА ФАРМАКОПЕЯ УКРАЇНИ 1.4

Created for http://www.uapf.com.ua

5.1. Загальні тексти з мікробіології

—10' КУО максимально допустиме число = 20:

—10: КУО максимально допустиме число — 200:

—10" КУО максимально допустиме число — 2000. і т.і..

В Табд. 5.1.4.-1 наведений перелік окремих видів мікроорганізмів, для яких встановлено критерії прийнятності. Цей перелік не є вичерпним, і для окремих лікарських засобів може бути необхідним проведення випробування на наявність інших видів мікроорганізмів в залежності від природи вихідних матеріалів та виробничого процесу.

Якщо доведено, що жоден з рекомендованих методів випробування не дає можливості провести достовірне визначення відповідності числа мікроорганізмів в лікарському засобі встановленому нормуванню, то слід використовувати придатну методику з межею виявлення найбільш близькою до визначеного критерія прийнятності.

Важливість випробування на наявність інших видів мікроорганізмів, крім тих, що наведені у Табл. 5.1.4.-1. оцінюють з урахуванням наступних чинників:

—використання продукту: рівень небезпеки відрізняється в залежності від шляху введення (очі. ніс.

ідихальні шляхи):

і— природа продукту: його здатність підтримувати ріст мікроорганізмів, наявність належного антимікробного консерванту;

—спосіб застосування;

—споживач: ризик може відрізнятися для новонароджених. дітей та ослаблених пацієнтів;

^використання імуносупресорних агентів, кортикостероїдів;

—наявність хвороб, ран, пошкодження органів.

Там де це обгрунтовано, аналіз ступеню ризику суттєвих чинників здійснює персонал, який має спеціальну освіту в галузі мікробіолога та інтерпретації даних мікробіологічних випробувань.

Вимоги до мікробіологічної чистоти сировини слід встановлювати з урахуванням обробки, якій піддають продукт, поточних методів випробування та доступності матеріалів певної якості.

Таблиця 5.1.4.-2

Критеріїприйнятності мікробіологічної чистоти нестерипьних субстанцій для фармацевтичного

використання

	ТАМС	TYMC
Субстанції для	КУО/г або КУО/мл КУО/г або КУО/мл
	10'	ІО2
фармацевтичного

застосування

• Рекомендовані критерії прийнятності мікробіологічної чистоти рослинних лікарських засобів для

орального застосування наведені в статті (5.1.8).*

А

5.1.5.ЗАСТОСУВАННЯ КОНЦЕПЦІЇ F„ ПРИ ПАРОВІЙ СТЕРИЛІЗАЦІЇ ВОДНИХ ЛІКАРСЬКИХ ЗАСОБІВ

Дана стаття носить інформаційний та рекомендаційний характер.

Для процесу стерилізації насиченою парою під величиной ^розуміють летальність мікроорганізмів (для яких теоретична величина ZflopiBHioe 10). визначену як еквівалентний час в хвилинах при температурі 121 °С. що забезпечується при стерилізації препарату в кінцевому контейнері.

Загальна величина Г0для процесу стерилізації враховує фази циклу нагріву й охолоджування та може бути обчислена як інтеграл від ступеню летальності відносно часу в дискретних інтервалах температури.

Якщо цикл парової стерилізації вибирається на основі концепції Fff. велику увагу слід приділяти тому, щоб довести, що стерильність досягнута. На додаток до валідації процесу стерилізації може бути також необхідно проводити безперервний мікробіологічний контроль у процесі виробництва, щоб показати, що мікробіологічні параметри знаходяться у встановлених межах та дають значення ступеню надійності стерилізації (СНС) 10"* або краще.

Для процесу парової стерилізації величина Z встановлює зв'язок між термічною стійкістю мікроорганізмів тазміною температури. Величина ZBionoBwae зміні температури, шо приводить до десятиразової зміни величини D.

Величина D (величина десятикратного зниження) — це значення параметра стерилізації (тривалості або поглиненої дози), необхідне для зниження числа життєздатних клітин мікроорганізмів до 10% від їх вихідного числа. Величина D має сенс тільки для точно визначених умов стерилізації.

Застосовуються наступні математичні формули:

	F0 = Dm (log N0 - log JV)=DIZI log IF
де:
D!2,	— величина D для тест-мікроорганізмів (5.1.2)
	при 121 °С;
N0	— початкове число життєздатних мікроорганіз-
	мів;

N— кінцеве число життєздатних мікроорганізмів;

IF — фактор інактивації.

	z -	Т--~Т>	.
		log Д - log D:
де:
D,	— величина D для мікроорганізмів при темпе-
	ратурі Т,;
D:	— величина Daля мікроорганізмів при темпе-
	ратурі Т:.

176

ДЕРЖАВНА ФАРМАКОПЕЯ УКРАЇНИ 1.4