Сопоставление генетическойи физической карт фага а

Данные электронной микроскопии позволяют установить точное соответствие между генетической картой фага λ, построенной на основе данных о рекомбинации, и молекулой ДНК, представляющей собой хромосому фага λ. Для решения этой задачи используют делеций (λb)

Рис. 7.10. Локализация конечных точек gαl-замещений на генетической карте фага λ производится по наличию рекомбинантов дикого типа в скрещиваниях между штаммами λdgαl с известными sus-мутантами. Изображенная карта построена по данным таблицы 7.5.

212Организация и передача генетического материала

Рис, 7.11. Схема образования гетеродуплекса между одноцепочечными молекулами ДНК, исходно входившими в состав двухцепочечных молекул, различающихся между собой делециями и перестройками. Геном, в котором участок imm²¹ заменен на imm^λ короче генома фага λ дикого типа; такая перестройка называется делецией b5.

и замещения (λdgal, λbio), описанные в предыдущем разделе. Кроме того, оказываются полезными близкородственные «лямбдоидные» фаги (фаги 434, 82, 21), геном которых содержит некоторые гены, общие с фагом λ, а также негомологичные фагу λ области. Каждый член семейства лямбдоидных фагов синтезирует характерный лишь для него уникальный репрессор, и, следовательно, ответственные за иммунитет участки генома (imm) y них также уникальны. Другими словами, области иммунитета в разных лямбдоидных фагах негомологичны. На рис. 7.11 схематически представлено образование гетеродуплексных молекул ДНК, в которых каждая комплементарная цепь имеет свое генетическое происхождение. Электронно-микроскопическое исследование таких гетеродуплексных молекул позволяет идентифицировать комплементарные и некомплементарные области (рис. 7.12). Более точно можно сказать, что хорошо воспроизводимые измерения протяженности двухцепочечных участков таких гетеродуплексных молекул ДНК позволяют установить положение концевых точек делеций и добавок в таких молекулах. Соответствие между этими концевыми точками в молекуле ДНК и концами соответствующих перестроек на генетической карте можно установить, получая гетеродуплексы из одноцепочечных молекул.

7. Геном вируса213

Рис. 7.12. Электронная микрофотография гетеродуплекса λgal/λ. А. Препарат гетеродуплекса λdgal Ρ73/λb5. Одноцепочечные участки на фотографии испещрены кружочками (обозначение b5 объяснено в подписи к предыдущему рисунку). Б. Препарат гетеродуплекса λdgal Ρ74/λ ^+ , на котором отчетливо видны одноцепочечные участки. Измерение длины двухцепочечных участков дает оценку физического расстояния от концов делеций до концов молекулы. Присутствие делеций b5 на микрофотографии А показывает, что правый конец изображенной здесь молекулы соответствует правому концу генетической карты, поскольку b5 расположена справа от gal. [Dаvis R. W., Parkinson J. S. (1971). J. Mol. Biol., 56, 403.]

ДНК с известными генетически картированными делециями и добавками (рис. 7.11). Такой гетеродуплексный анализ позволяет построить физическую карту параллельно с генетической картой на рис. 7.7. Поскольку известна общая длина молекулы ДНК λ (она составляет около 49 000 н. п.), можно определить примерную величину каждого гена.