Окраска по Романовскому

Этим методом окрашивают элементарные тельца Пашена, Боллингера

другие.

Мазки-отпечатки высушивают на воздухе, фиксируют 3-5 мин. Метиловым спиртом или 10-15 мин. В смеси эфира со спиртом (1:1). Затем их погружают в раствор краски Романовского. Приготовленный по следующей прописи: 1 каплю основного раствора краски смешивают с 1 мл дистиллированной воды. Окрашивание проводят на предметном стекле, в специальных ванночках или чашках Петри методом подливания краски под препарат, красят 30-40 минут, затем мазок промывают, высушивают фильтровальной бумагой, ополаскивают спиртом, снова промывают и высушивают. При микроскопии на голубом фоне препарата элементарные тельца Пашена будут красные, а тельца-включения - темно-фиолетовые.

Элементарные тельца Пашена хорошо обнаруживаются при окраске препарата по Морозову. Это сложный метод окраски, в основе которого лежит обработка препарата солями серебра.

При микроскопии препаратов, окрашенных этим методом, элементарные тельца на светло-коричневом фоне клеток имеют вид темно-коричневых округлых зерен. Они могут располагаться группами, одиночно или в виде цепочек.

Окраска по методу Муромцева

Чаще применяется для обнаружения телец-включений Бабеша-Негри

при бешенстве.

Мазки фиксируют в метиловом спирте 3-5 минут, теплой смесью спирта с эфиром напополам. Фиксирующие жидкости не оказывают негативного действия на качество окрашивания в течение 2-3 недель, поэтому их сохраняют в фиксирующей жидкости.

После фиксации мазок ополаскивают в дистиллированной воде и погружают на 10 минут в синьку Мансона (100 мл дистиллированной воды добавляют 5-8г буры, 2 грамма кристаллической метиленовой сини, которую разбавляют дистиллированной водой 1:40). Непромытый мазок выдерживают в 10% растворе танина до перехода цвета мазка из сине-фиолетового в светло-голубой. Затем мазок промывают водой, высушивают фильтровальной бумагой. Мазок микроскопируют в иммерсионной системе без покровного стекла. Цитоплазма нервных клеток светло-голубого цвета, ядра клеток синие, тельца Бабеша-Негри розово-фиолетовые или красные с темными включениями.

Окраска по методу Михина

Мазки фиксируют в фиксирующей жидкости, высушивают

фильтровальной бумагой и окрашивают 30-40 минут краской Романовского, разведенной 1:10. Затем мазки промывают подкисленным спиртом (1 капля ледяной уксусной кислоты на 30 мл 96⁰ спирта), а затем водой. Мазки высушивают фильтровальной бумагой и микроскопируют. Фон мазка должен быть фиолетово- розовый, нервные клетки голубого цвета, ядра клеток темно-фиолетовые, а тельца Бабеша-Негри розово-красные с точечными включениями темно-синего цвета.

Самостоятельная работа студентов:

1. Студенты просматривают готовые препараты из патматериала с тельцами Бабеша-Негри, Пашена, Руборта, окрашенные по методу Муромцева и Морозова.

2. Студенты готовят мазки из патматериала, окрашивают их по методу Романовского и микроскопируют.

Контрольные вопросы:

1. Что такое элементарные тельца, у каких вирусов их можно обнаружить?

2. Что такое тельца-включения, у каких вирусов их можно обнаружить?

3. Каким образом и для чего окрашивают препараты по методу Романовского?

4. Каким образом и для чего окрашивают препараты по методу Муромцева?

5. Каким образом и для чего окрашивают препараты по методу Михина?