Самостоятельная работа студентов:

1. Студенты знакомятся с видами лабораторных животных.

2. Студенты проводят интраназальное и внутримышечное заражение белых мышей.

3. Студенты наблюдают за состоянием лабораторного животного после заражения.

4. Студенты знакомятся с методами заражения куриных эмбрионов.

5. Студенты проводят овоскопию куриных эмбрионов.

6. Студенты заражают куриные эмбрионы.

Контрольные вопросы:

1. Для каких целей и какими методами заражают лабораторных животных в вирусологической практике?

2. Каковы признаки наличия вируса в организме лабораторных животных?

3. Каковы особенности культивирование вирусов в организме лабораторных животных?

4. Для каких целей заражают курные эмбрионы?

5. Каково преимущество заражения куриных эмбрионов?

6. Каковы методы заражения куриных эмбрионов?

Занятие 7 Отбор вирусосодержащего материала от погибших эмбрионов кур и дальнейшая работа с вирусосодержащим материалом.

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ: Ознакомить студентов с особенностями отбора

вирусосодержащего материала от погибших эмбрионов кур и дальнейшая работа с вирусосодержащим материалом.

МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ:

- Подготовленный для работы бокс;

- халаты, перчатки, маски, головные уборы и бахилы;

- зараженные 7-9 суточные куриные эмбрионы;

- набор стерильных хирургических инструментов - пинцет, ножницы, скальпель в стаканчике со спиртом;

- стерильные пастеровские пипетки с резиновой грушей;

- спиртовки;

- иодированный спирт для дезинфекции скорлупы;

- стерильная чашка Петри - 3 шт.;

- флакон со стерильным физраствором;

- стерильные пробирки - 10 шт.;

- штатив для пробирок;

- ватный квачик в пустой пробирке для обжигания скорлупы.

Зараженные куриные эмбрионы помещают в термостат для дальнейшей инкубации при температуре +37°С - +38°С в процессе которой происходят репродукция внесенных вирусов и их накопление в соответствующих структурах.

За эмбрионами ведут постоянное наблюдение, просматривают на овоскопе, отбирая погибших. Погибшие эмбрионы не обладают подвижностью, их кровеносные сосуды загустевают или в них выражена прерывистость, нет пульсации.

Гибель эмбрионов в первые 24 ч после заражения чаще всего обусловлена размножением грибов, бактериальной микрофлоры, внесенных в эмбрион вместе с инокулятом, или травмированием при заражении. Эта гибель считается неспецифической. В более поздние сроки эмбрионы гибнут в результате, как правило, размножения в эмбрионах вируса. Обнаружив погибшие эмбрионы, их сразу же переносят в холодильник с температурой +4°С. Такие условия, с одной стороны, способствуют сохранению активности накопившегося в эмбрионе вируса, с другой – уплотнению тканей и запустению сосудов, что значительно облегчает последующее вскрытие. Эмбрионы инкубируют до момента максимального накопления вируса. Для каждого вируса и даже штамма этот срок является определенным и варьирует в пределах от 2 до 7-8 суток. Затем эмбрионы умервщляют охлаждением при +4°С в течение 3-4 часов и вскрывают.

Вскрывают куриные эмбрионы с целью обнаружения признаков размножения в них вирусов и получения вирусосодержащего материала. Последнее требует правил асептики при вскрытии.

В зависимости от того, каким вирусом был заражен эмбрион (а значит в какой структуре он накопился соответственно тропизму), вирусосодержащим материалом могут служить ХАО, ткани зародыша, желточный мешок (его стенки), а также аллантоисная и амниотическая жидкости. В последнем случае выделение вируса наиболее удобно, так как экстраэмбриональные (аллантоисная, амниотическая) жидкости представляют, по существу готовую суспензию вируса.

Перед вскрытием скорлупу обрабатывают йодированным спиртом (фламбируют). Стерильным ножницам срезают скорлупу над воздушной камерой, через которую заражали. При этом яйцо держат под некоторым углом, чтобы скорлупа не упала внутрь.

Обнажившуюся ХАО осматривают, приподнимая ее пинцетом с целью установления в ней патологоанатомических изменений. Часть ХАО, на которую был нанесен вирусосодержащий материал, имеет обычно наиболее выраженные изменения. Для более тщательного осмотра ее и взятия этой части приподнимают пинцетом ХАО в этом месте срезают как можно больше, переносят ее в стерильную чашку Петри с физраствором, ополаскивают, расправляют пинцетами и рассматривают на темном фоне. Наиболее характерные изменения на ХАО соответствуют определенному вирусу: очень часто просматриваются округлые воспалительные очаги, белесоватые перламутровые бляшки с некротическим центром, серовато-белый цвет оспин, расширение сосудов и др.

Аллантоисную жидкость в количестве до 10 мл отсасывают пипеткой, которой прокалывают подскорлуповую оболочку ХАО над телом зародыша. Такое направление пипетки предотвращает случайный разрыв стенки желточного мешка и смешивание его содержимого с набираемой аллантоисной жидкостью.

Амниотической жидкости удается отсосать до 1 мл. Для этого после удаления аллантоисной жидкости пипетку вводят в амнион между головой и телом зародыша под его шеей.

Для получения желточного мешка как вирусосдержащего материала желток извлекают на чашку Петри, стенку его разрезают ножницами и отполаскивают от содержимого в физрастворе. Тело зародыша извлекают удерживая его за шею.

Наличие гемагглютинирующего вируса определяют в ориентировочной реакции гемагглютинации.

При вскрытии куриных эмбрионов ставят бактериологический контроль вирусосодержащего материала посевом на МПА, МПБ, МППБ и среду Сабуро. Вирусосодержащий материал хранят при минус 25°С и ниже.