Самостоятельная работа студентов:

1. Студенты знакомятся с методами вскрытия куриных эмбрионов.

2. Студенты проводят овоскопию погибших куриных эмбрионов.

3. Студенты вскрывают куриные эмбрионы.

Контрольные вопросы:

1. Для каких целей вскрывают курные эмбрионы?

2. Каковы признаки наличия вируса в куриных эмбрионах?

3. Каковы методы вскрытия куриных эмбрионов?

Занятие № 8 Культивирование вирусов на культуре клеток.

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ: Ознакомить студентов с культурами клеток, их

классификацией и практическим применением, а также с питательными средами для культур клеток и с техникой приготовле­ния одноклеточных трипсинизированных культур клеток.

МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ:

Подготовить на рабочем столе в боксе:

- Набор стерильных хирургических инструментов - пинцет, ножницы, скальпель в стаканчике со спиртом;

- спиртовые ватные тампоны в чашках Петри для обработки рук;

- живой куриный эмбрион или другой свежий для изготовления культуры клеток.

- спиртовки;

- раствор Хенкса или фосфатно-буферный раствор;

- 2 стерильные чашки Петри;

- стерильный флакон с пробкой для измельчения ткани;

- 0,25% раствор трипсина;

- электромагнитная мешалка;

- запаянный в полихлорвиниловой капсуле магнит;

- стерильные пипетки на 1 мл - 10 шт.;

- стерильные резиновые пробки для пробирок - 10 шт.;

- стерильные центрифужные пробирки с пробками - 10 шт.;

- центрифуга;

- питательная среда 199;

- микроскоп с осветителем;

- камера Горяева с притертым покровным стеклом для подсчета концентрации клеток в питательной среде;

- горизонтальный штатив для пробирок;

- маркер;

- халаты, перчатки, маски, головные уборы и бахилы.

Культура клеток (КК) - это изолированные, преимущественно эмбриональные, клетки различных органов животных (почек, легких, семенников, кожи, мышц и др.), живущие и размножающиеся в искусственных условиях вне организма (in vitro) в специальных питательных средах.

Культуры клеток можно получать не только из органов эмбрио­нов, но и из органов различных молодых убитых животных, одна­ко адаптация эмбриональных клеток к искусственным питательным средам, интенсивность размножения и чувствительность их к различным вирусам значительно выше, чем у клеток, полученных из органов молодых и взрослых животных.

Часто в ветеринарной практике для приготовления КК используют 9-10 суточные куриные эмбрионы (КЭ), эмбрионы кроликов, мышей, морских свинок, различных сельскохозяйственных и домашних жи­вотных. В медицинской вирусологии чаше всего применяют различ­ные перевиваемые линии клеток и культуры клеток из фибробластов эмбриона человека. Этот материал очень дешевый, стерильный и всегда в достаточном количестве имеется в гинекологических отделениях родильных домов, после прерывания беременности у женщин.

Открытию метода культивирования животных клеток in vitro предшествовали многолетние поиски и разработки рецепта питательной среды для изготовления дешевой лабораторной модели для культивирования вирусов, которые могли бы заменить КЭ, лабораторных и сельскохозяйственных животных. Приоритет в этом вопросе принадлежит американским ученым. В 1943 году Херанг, в 1949 году Эндрес изучали этапы дегенерации клеток под действием вируса, впоследствии названных цитопатическим действием (ЦПД). Живые и погибшие клетки хорошо видны в обычный световой микроскоп уже при малом увеличении. В 1952 году аме­риканские исследователи Дульбеко и Фогт разработали методику получения первично трипсинизированных культур клеток, которые сразу же получили широкое внедрение в практику медицинских и ветеринарных вирусологических лабораторий, биокомбинатов, би­офабрик и других учреждений.

В последние 25-30 лет разработаны методики получения диплоидных, перевиваемых, суспензионных и других культур, которые, более экономичны в вирусологической практике.