Самостоятельная работа студентов:

1. Студенты знакомятся с классификацией культур клеток.

2. Студенты знакомятся с питательными средами для культур клеток.

3. Студенты знакомятся с правилами приготовления однослойной трипсинизированной культурой клеток в боксе кафедры.

4. Студенты микроскопируют монослой однослойной трипсинизированной культуры клеток.

КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ:

1. Какова классификация культур клеток?

2. Каковы поддерживающие и ростовые питательные среды для культур клеток?

3. Какова схема приготовления однослойной трипсинизированной культуры клеток?

Занятие 9 Методы заражения культур клеток. Цитопатогенное действие вируса на клетку.

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ: Ознакомить студентов с методикой заражения

однослойной первично-трипсинизированной культурой клеток и оценкой результата действия вирусов на клетку по цитопатогенному действию.

МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ:

- Питательные среды и сбалансированные солевые растворы для культур клеток (раствор Хенкса, раствор Версена);

- нормальные консервированные культуры клеток и культура клеток с ЦПД;

- вирусосодержащий материал;

- свежеприготовленные культуры клеток;

- спиртовки;

- подготовленный стерильный бокс;

- стерильные пробирки, пипетки;

- микроскопы;

- штативы для микроскопии пробирок с культурами клеток;

- ватные спиртовые тампоны для обработки рук;

- квачик для обжигания пробок питательной среды и р-ра Хенкса.

Культивирование вирусов в культуре клеток сводится к следующему: подбору культуры клеток; получению вируссодержащего материала; подготовке для заражения; заражению клеток вируссодержащим материалом; культивированию вируса в клетках; индикации вируса в культуре клеток; сбору культуральной жидкости и идентификации в ней вируса.

Подбор культур клеток.

Не всякая клетка чувстви­тельна к любому вирусу. Вирус к первичной культуре обычно ус­пешно адаптируется при условии, если культура получена из орга­нов животного, естественно восприимчивого к данному вирусу. Од­нако адаптация вируса к перевиваемым клеткам более сложна, а в ряде случаев неосуществима.

Клетки, засеянные в питательную среду, оседают вниз, прикрепляются к стеклу и начинают активно размножаться в термостате при температуре 37С. Через 2-3 суток после их засева формируется сплошной клеточный слой (монослой), который определяется путем микроскопии культуры клеток при малом увеличении в специальных металлических или деревянных штативах.

Скорость формирования клеточного монослоя зависит от вида ткани, вида животных, качества ростовой питательной среды, исходной концентрации клеток при засеве и других факторов. Для культивирования вируса используют чувствительные молодые культуры клеток. Продлить жизнедеятельность клеток монослоя можно заменой ростовой питательной среды поддерживающей средой и помещением культуры клеток в бытовой холодильник при температуре +2 +4С.