- •05201051003 Мазепа
- •1Тцр — полимеразная цепная реакция
- •Внедрение в практику.
- •1.2.2 Диагностика хеликобактерной инфекции
- •2.3. Диагностика парентеральных вирусных гепатитов. Парентеральные вирусные гепатиты - группа инфекционных
- •1.3 Внедрение и использование пцр в практическом здравоохранении Российской Федерации.
- •2.Собственные исследования
- •2.1. Материалы и методы
- •2.1.2. Методы.
- •2,5 Мкл праймеров по 5-15 пмоль/мл каждого; 5 мкл 10-кратного реакционного буфера 2,5 мкл dNtp по 1мМ каждого; 1 мкл Tag-пoлимepaзы 0,5 е.А. 29 мкл деионизованной воды
- •1. Готовили реакционную смесь для амплификации из расчета на 1 пробу: буфер — Змкл, аЫтр - 3 мкл,
- •2.2.1.1. Выбор приборов для проведения пцр и фиксирования результатов.
- •2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 - Фрагменты гена шигоподобного токсина vt1.
- •2.2.2.4, Алгоритм использования метода пнр в диагностике бактериальных оки
- •Первичное обследование лиЦ—
- •2.2.3.2. Сравнительный анализ результатов детекции h.Pylori. Полученных традиционными и молекулярно-биологическими методами.
- •2.2.3.3. Изучение распространенности h.Pylori у больных с различными формами гастродуоденальной патологии
- •Тип патологии
- •2.2.4.4. Изучение вероятности вертикального пути передачи вгс и вгв.
- •Положительный результат
- •Продолжение лечения
- •Отрицательный результат
- •Назначение лечения
- •Назначение лечения
- •Отрицательный результат Продолжение лечения
- •2.2.5.1. Место пцр в общей системе методов диагностики нуги.
- •Выявлены u.Urealyticuym m hominis
- •IПри необходимости выявление возбудителей в отдельных субстратах
- •Список источников литературы.
- •307 307Приложение 1
- •310Частота выявления возбудителей нуги по сезонам 1998-2008 годов.
2.2.2.4, Алгоритм использования метода пнр в диагностике бактериальных оки
Проведенные нами исследования позволили установить, что применение метода ПЦР целесообразно рекомендовать для решения следующих задач клинической диагностики и системы эпиднадзора за ОКИ:
1.Первичное экспрессное обследование лиц, поступающих в инфекционные стационары, при спорадической заболеваемости для выявления основных бактериальных возбудителей ОКИ.
Оперативное скрининговое обследование больных и контактных лиц, выявление обсемененности объектов внешней среды, продуктов питания для определения источника, факторов и путей передачи инфекции при расшифровке вспышечной заболеваемости ОКИ.
Определение эффективности санитарно-противоэпидемических мероприятий.
Выявление труднокультивируемых возбудителей ОКИ,
5.Определение патогенности клинических изолятов энтеропатогенных Escherichia coli, выделенных от больных ОКИ путем обнаружения генов факторов патогенности.
Для решения первых трех задач рекомендуется проведение комплексного ПЦР-исследования на бактерии родов Salmonella, Shigella, Campylobacter и Yersinia enterocolytica по следующей схеме:
Выделение нуклеиновых кислот из исследуемого материала (фекалии, ректальные пробы, вода, продукты питания и др.) с использованием комплекта реактивов «Сорб Б» (ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора).
Одновременное проведение ПЦР-детекции Salmonella, Shigella, Campylobacter и Yersinia enterocolitica с помощью тест-систем серии AmplySens (ФГУН «ЦНИИЭ Роспотребнадзора»).
Электрофоретическая детекция продуктов амплификации с использованием комплекта реактивов «ЭФ-200» (ФГУН «ЦНИИЭ Роспотребнадзора»).
Проведение этиотропной терапии в случае обнаружения возбудителей в клиническом материале от больных
Контрольное обследование на соответствующий инфекционный агент после завершения лечения.
Для выявления труднокультивируемых возбудителей ОКИ по той же схеме следует проводить ПЦР детекцию бактерий рода Campylobacter. В лабораториях, не имеющих возможности культивировать Yersinia enterocolitica, их также целесообразно выявлять методом ПЦР. Выявление генов факторов патогенности рекомендуется проводить для определения причин тяжелого и особо тяжелого течения ОКИ, вызванных энтеропатогенными эшерихиями и бактериями рода Shigella. Объективный результат может быть получен при исследовании чистых культур возбудителей ОКИ. Следует проводить поиск генов термолабильного, термостабильного, и шигаподобных токсинов 1 и 2 типов с помощью соответствующих тест систем серии Amply Sens (ФГУН «ЦНИИЭ Роспотребнадзора»), используя традиционную схему, предложенную выше. Поскольку на этапе выделения ДНК обработке подвергается бактериальная масса, вместо комплекта «Сорб-Б» может быть использован «Сорб-А».
Таким образом, проведенные исследования позволили получить данные о распространенности наиболее значимых генов факторов патогенности энтеробактерий, подтвердить целесообразность применения ПЦР в диагностике ОКИ и определить наиболее значимые направления и оптимальные варианты использования этой современной технологии (рис. 13, 14).Выявление труднокультивируемых возбудителей ОКИ
;