2.Собственные исследования

2.1. Материалы и методы

Диссертационная работа выполнена на базе лаборатории молекулярно- генетических методов надзора за инфекционными заболеваниями ФГУН «Нижегородский НИИ эпидемиологии и микробиологии им. академика И.Н.Блохиной» Роспотребнадзора. Исследования осуществлялись в рамках Федеральной Программы «Здоровье населения России», отраслевой научно- исследовательской программы МЗ РФ №034 «Эпидемиология и микробиология» по договору «Новые технологии в профилактике, диагностике и лечении инфекционных заболеваний и использование их в эпиднадзоре» и ведомственной (отраслевой) целевой программы «Научные аспекты обеспечения санитарно-эпидемиологического благополучия в Российской Федерации на 2006-2010 г.г» по комплексной теме «Разработка комплексных мероприятий по диагностике, профилактике, лечению и эпиднадзору за актуальными инфекциями». Исследование носило комплексный многолетний характер (основной период выполнения работы 1995-2009) и включало широкомасштабные микробиологические, молекулярно-генетические исследования в ЛПУ различного профиля на территории Нижнего Новгорода и Нижегородской области. Исследования проводились в следующих направлениях:

1 .Совершенствование системы диагностики бактериальных ОКИ.

2. Совершенствование системы диагностики хеликобактерной инфекции.

£

2. Совершенствование системы диагностики парентеральных вирусных гепатитов.

3. Совершенствование системы диагностики НУГИ.

Основными базами при выполнении исследований по диагностике ОКИ являлись Нижегородское предприятие по производству иммуно­биологических препаратов «ИМБИО», детская клиническая инфекционная больница №8, Н.Новгород; клиническая инфекционная больница №9, Н.Новгород; Городской центр санэпиднадзора Н.Новгорода; Областной центр санэпиднадзора Нижегородской области; кафедра эпидемиологии Нижегородской государственной медицинской академии, кафедра молекулярной биологии и иммунологии биологического факультета Нижегородского государственного университета. Ими были предоставлены образцы клинического материала (фекалии, ректальные пробы), объектов внешней среды и результаты микробиологических исследований по выявлению бактериальных возбудителей ОКИ.

Клиническими базами при выполнении исследований по диагностике хеликобактерной инфекции являлись клиника Нижегородского НИИ эпидемиологии и микробиологии; ФГУ «Нижегородский НИИ детской гастроэнтерологии Росмедтехнолгий»; ГУЗ «Нижегородский областной клинический диагностический центр», кафедра внутренних болезней Военно- медицинского института Федеральной пограничной службы; кафедра общей и клинической фармакологии Нижегородской государственной медицинской академии, ООО «Санаторий имени ВЦСПС» г. Н. Новгород. Из этих учреждений получены образцы биоптатов, желудочного сока, фекалий и представлены данные о выявлении хеликобактера методами, основанными на микроскопии.

Исследования по диагностике гепатитов выполнялись совместно с гепатологическим центром ГУЗ «Городская инфекционная клиническая больница №2» Н.Новгород; ГУЗ «Городская инфекционная клиническая больница №23» Н.Новгород; Медсанчастью №50 г.Сарова Нижегородской области. Ими был предоставлен материал для исследования (образцы цельной крови, сыворотки крови, плазмы крови), результаты ИФА тестов на маркеры гепатитов и другая информация о пациентах.

При исследованиях по диагностике НУГИ клинический материал (соскобы слизистых цервикального канала, уретры, влагалища от женщин; соскоб уретры, моча от мужчин; кровь, моча, слюна, слезное отделяемое от детей) поступал из следующих медицинских учреждений: МЛПУ Женская консультация №5, Н.Новгород, МЛПУ Женская консультация №20, Н.Новгород, Медсанчасти Нижегородского автозавода, Роддома №3, Н.Новгород, Роддома №6, Н.Новгород , Роддома №7, Н.Новгород ; ГУЗ «Нижегородская областная клиническая больница им. Н.А.Семашко», ГУЗ «Нижегородская областная детская клиническая больница», МЛПУ Городская детская клиническая больница №1, Н.Новгород и МЛПУ Городская детская клиническая больница №27, Н.Новгород, ФГУ «Нижегородский институт детской гастроэнтерологии Расмедтехнологий», МЛПУ Городская клиническая больница №39, Н.Новгород. 2.1.1 Материалы

В ходе выполнения работы исследовались чистые культуры микроорганизмов, образцы клинического материала от больных и здоровых людей (кровь, слюна, моча, фекалии, слезное отделяемое, ликвор, биоптаты слизистых оболочек, запарафиненные срезы), пробы продуктов питания, смывы с объектов внешней среды, пробы питьевой воды. В таблице 2 представлен объем выполненных исследований.

Для проведения исследований было использовано типовое оборудование микробиологической и биохимической лабораторий. Исследования по гибридизации с радиоактивномеченными ДНК-зондами осуществлялись на базе изотопной лаборатории (3 -класс опасности). Для проведения ПЦР применялись отечественные ДНК-амлификаторы: экспериментальная модель Института биофизики РАН; «Amply-250» (фирма «Биоком», Москва); «Терцик МС2» (фирма «ДНК-технолгия», Москва) и зарубежные модели «Gene cycler» и «My cycler» (фирма «Bio-Rad», США).Таблица 2. Раздел работы	Объект исследования	Объем исследования
		Количество объектов	Количество ПЦР исследований
Исследования на ОКИ	Взрослые	108	432
	Дети	884	2214
	Объекты внешней среды	450	1084
	Чистые культуры бактерий.	1814	4240
Исследования на Н.ру1оп	Взрослые	975	1462
	Дети	318	478
Исследования на гепатиты	Взрослые	3247	7143
	Дети	986	2170
Исследования на возбудители НУГИ	Взрослые	17860	39128
	Дети	7084	19836
	Секционный материал	364	1930
Всего		34090	80117