Лабораторная диагностика

Выделить возбудителя туберкулеза в чистом виде трудно. Успех во многом зависит от исследуемого материала. В качестве последнего можно использовать пораженные органы и ткани, кровь, экссудат, транссудат, гной, молоко, масло, творог, мочу, фекалии, навоз, почву, воду, соскобы с различных объектов животноводческих помещений и др. В каждом случае перед посевом применяют соответствующий метод обработки материала.

Для освобождения от посторонней микрофлоры исследуемый материал (молоко, мочу, слизь, пораженные органы и ткани) обрабатывают 6-10% раствором серной кислоты (метод Гона) не более 25-30 мин.

Для обработки жидкого, полужидкого, кашицеобразного мате¬риала и соскобов с объектов среды обитания животных используют метод флотации. Сущность метода заключается в том, что исследуемый материал взбалтывают в колбе вместе с углеводородами (бензол, бензин и др.), а всплывающий слой пены - флотат, содержащий микобактерии туберкулеза, используют для приготовления мазков, посевов на питательные среды, заражения лабораторных животных.

Дифференциация микобактерии туберкулеза. Для дифференциации микобактерии существуют следующие методы: микроскопический, культуральный, цитохимический, биохимический, серологический, аллергический, биологический и др.

Микроскопический метод. Бычий вид - микобактерии достигают длины 1,5-3,5 и толщины 0,3-0,5 мкм; также встречаются в виде овоидных и кокковидных форм. Палочковидные формы чаще прямые и изогнутые, с округленными концами и зернистостью.

Человеческий вид микобактерии - более длинные, тонкие и стройные. Микобактерии птичьего вида наблюдаются в виде коротких и длинных полиморфных палочковидных форм. Представители микобактерии мышиного вида тоже полиморфны. Необходимо знать, что размеры и форма всех туберкулезных микобактерии весьма относительны и при определенных условиях выращивания колеблются, иногда в довольно широких пределах.

Культуральный метод. Вирулентные культуры микобактерии бычьего вида на питательных средах растут очень медленно в виде сферических, гладких и шероховатых колоний, чаще в виде сухих крошек.

Свежевыделенные культуры микобактерии птичьего вида растут быстрее, чем человеческого и бычьего. Рост характеризуется образованием гладких, мелких, круглых, белых, блестящих, с ровными краями колоний, располагающихся как единично, так и в виде скоплений или сплошного слизистого налета.

Биологический метод. Сущность биологического метода дифференциации заключается в определении патогенности культуры для морских свинок, кроликов, птиц и других лабораторных животных, которые отличаются восприимчивостью к различным микобактериям туберкулеза.

Дифференциацию выделенных культур проводят на двух кроликах массой не менее 1,5-2 кг, которым в краевую вену уха вводят суспензию культуры микобактерии в физиологическом растворе: первому в дозе 0,1, второму - 0,01 мг бактериальной массы.

Возбудитель туберкулеза бычьего вида на протяжении 3 месяцев вызывает генерализованное поражение, человеческого вида - нетипичные туберкулезные очажки регрессивного характера, птичьего вида - септическую форму болезни без образования специфических патологических изменений в органах и тканях с летальным исходом в течение 2-3 недель.

Параллельное заражение двух морских свинок такими же дозами культуры позволяет дифференцировать возбудителя птичьего вида, к которому они нечувствительны, в то время как микобактерии человеческого и бычьего видов у них вызывают прогрессивные туберкулезные изменения. У кур, зараженных внутривенно бактериальной массой, микобактерии птичьего вида в дозе 1 мг вызывают туберкулезные поражения селезенки, печени и кишечника. Куры к возбудителю человеческого и бычьего видов менее чувствительны.

Биохимический метод. Основан на проявлении различной ферментативной активности микобактерии разных видов.

Наиболее демонстративны следующие тесты биохимической дифференциации микобактерии: ниациновый тест, реакция восстановления нитратов, амидазная проба, каталазная и арилсульфатазная активность, рост на среде с салицилатом натрия, деградация (разрушение) салицилата натрия, ПАСК, использование нитрата как единственного источника азота, устойчивость к 5% хлориду натрия и пикриновой кислоте, сахаролитическая активность, гидролиз твина-80 и др.

Серодиагностика. Для ранней диагностики туберкулеза, а также для определения антигенного родства между истинными и атипичными микобактериями используют реакцию связывания комплемента (РСК) с антигенами УНИИЭВ (Ю. Я. Кассич) и СибНИВИ (Э. Д. Лакман); реакцию пассивной, или непрямой, гемагглютинации (РПГА); реакцию кольцепреципитации; реакцию диффузной преципитации в геле (РПГ).

Аллергическая диагностика туберкулеза. Ведущее место в прижизненном распознавании туберкулеза у животных и птиц занимает аллергическая диагностика с использованием туберкулина (Р. Кох, 1890). Однако еще до Коха в России Гельман (1888-1889) изготовил экстракт из туберкулезных бактерий и испытал его с диагностической целью на больных туберкулезом коровах, получив положительный результат. Диагностика с помощью туберкулина наиболее распространена в медицине и ветеринарии. В настоящее время основным прижизненным методом исследования животных на туберкулез служит внутрикожная туберкулиновая проба. Туберкулин для млекопитающих изготавлива¬ют из штаммов только бычьего вида.

Для внутрикожной пробы применяют сухой очищенный туберкулин (протеин пурифиед дериват - ППД). ППД был предложен М. А. Линниковой для медицинской практики. В ветеринарии используют стандартизированный сухой очищенный туберкулин для млекопитающих, который содержит в диагностической дозе 10 000 ± 2000 туберкулиновых единиц (ТЕ), т. е. 0,2 мг препарата, растворенного в 0,2 мл растворителя.

Сухой очищенный туберкулин (ППД) для птиц готовят по той же технологии, что и ППД для млекопитающих - из культурального фильтрата микобактерий туберкулеза птичьего вида и применяют для диагностики у птиц и свиней.

Туберкулин вводят внутрикожно крупному рогатому скоту, буйволам, зебу, верблюдам, оленям в область средней трети шеи, свиньям - наружной поверхности основания уха, курам - в бородку.

С этой целью применяют инъекционные иглы (МРТУ № 46-84-42 или 0612), которые следует менять при каждом наполнении шприца туберкулином. Используют и безыгольные инъекторы марки ИБВ-0,1, БИ-7 «Овод», которые ускоряют и упрощают процесс введения туберкулина.

Учитывают реакцию через 72 ч по результатам измерения толщины кожной складки с учетом характера образовавшейся припухлости. При положительной реакции появляется разлитой отек размером 35 × 45 мм и больше, без строго очерченных границ, тестообразной консистенции, с повышенной местной температурой и чувствительностью (болезненность). Кожная складка увеличивается на 3 мм и более. Кожную складку измеряют с помощью кутиметра и по разнице между показателем толщины возникшей припухлости и складки неизмененного участка кожи устанавливают степень увеличения.

Курам туберкулин вводят внутрикожно в одну бородку, вторая служит контролем. Реакцию учитывают через 30-36 ч. Положительная реакция проявляется в виде опухания бородки, она утолщена, тестообразна, горячая и отвисает книзу.

Кроме внутрикожной пробы в определенных случаях используют глазную, подкожную и внутривенную пробы.

Крупный рогатый скот может быть инфицирован возбудителем человеческого, птичьего видов, паратуберкулезными или атипичными микобактериями. Такие животные положительно реагируют на туберкулин млекопитающих, но не являются туберкулезными. Такие реакции называют неспецифическими и разделяют на парааллергические и псевдоаллергические.

Парааллергические реакции - результат сенсибилизации крупного рогатого скота атипичными микобактериями, псевдоаллергические - результат воздействия возбудителей паразитарных болезней и других факторов.

Для дифференциации аллергических реакций у животных предложен комплексный аллерген (КАМ) из атипичных микобактерий (А.Н. Шаров, 1978).