Методы окраски бактерий.

Окрашивание простым методом (кокковые формы бакт, микрококки, стафилококки, диплококки, стрептококки) осущ-ся быстрее, исп-ся 1 краситель (водный раствор Пфейффера). Метод предст физико-хим процесс, при котором происходит поглощение красителя микробной клеткой. На слегка обезжиренное предметное стекло наносится капля стерильного физ раствора бактериологической петлей. В нее вносят бактерии и перемешивают, распределяют тонким слоем по стеклу, высушивают в верхнем пламени горелки, фиксируют и наносят метиленовую синь на 2-3 мин. Затем краска сливается, препарат промывается водой, высушивается фильтровальной бкмажкой и рассматривается в иммерсионной системе (+капля масла и исп 90 (100) объектив микроскопа).

Окраска по Грамму (палочковидные бактерии): на фиксированный мазок нанести рабочий раствор генцианфиолета на 2 мин. Промыть водой. Нанести раствор Люголя на 1 мин. Промыть водой. Обработать преперат спиртом 96% на 30 сек. Промыть водой. докрасить фуксином Пфейффера 2 мин. Промыть водой. Высушить фильтровальной бумагой. Гр + темнофиол. Гр – красные.

Устройство микроскопа.

Микроскоп – оптический прибор, предназначенный для изучении микрообъектов. В микроскопе различают механическую и оптическую части. Мех часть вкл штатив, предметный столик, тубус и систему винтов для передвижения.

Оптическая часть вкл объективы, окуляры и осветительный аппарат. Объективы предст систему линз, закрепленных в металлическую оправу. Передняя (фронтальная) линза самая маленькая, она производит основное увел-ие. Остальные линзы исправляют недостатки оптического изо-ия. Все объекитвы делят на сухие и иммерсионные. Окуляры вставлены в верхнюю часть тубуса. Они состоят из 2 плосковыпуклых линз.

Хар-ка микроскора – разрешающая спос-ть – величина обратная тому наименьшему расстоянию, на котором могут быть видны раздельно 2 соседних элемента структуры. Осветительный аппарат нах-ся под предметным столиком.

Работа с иммерсионной системой: вначале под малым увеличением наводят свет и определяют на препарате участок микроскопирования. Затем на выбранное место наносят каплю масла и осторожно погружают в нее фронтальную линзу иммерсионного объектива. Наводить на резкость следует путем поднимания объектива. После грубой наводки с пом макрометрического винта, осущ-ют более точную фокусировку с пом микрометрического винта. По окончании работы объектив понимают, убирают препарат, с фронтальной линзы снимают масло.

Подвижность бактерий

Осуществляется подвижность бактерий с помощью жгутиков. По жгутикам бактерии делятся на: монотрихи, лофотрихи, амфитрихи, перитрихи (кишечная палочка). Есть виды микроорганизмов, обладающие подвижностью, но жгутиков не имеют (лептоспиры, спирохеты). Их движение обусловлено импульсивными сокращениями двигательного фибриллярного аппарата клетки. Для изучения необходимо культивировать микроорганизм на жидкой питательной среде при оптимальной температуре, при исследовании культура должна быть 18 часовой. 

Подвижность бактерий исследуют двумя методами: «висячая» капля и «раздавленная». Метод «висячая» капля. Каплю молодой бульонной культуры наносят на покровное стекло. Используют предметное стекло с углублением (луночкой). Предметное стекло приклеивают к покровному и переворачивают вверх покровным стеклом. В таком препарате капля повешена с внутренней поверхности покровного стекла и находится в герметически закрытой влажной камере. Метод «раздавленная» капля. На обычное предметное стекло наносят каплю, накрывают покровным стеклом так, чтобы между стеклами не образовались пузырьки воздуха. Осторожно опускают объектив под контролем глаза (смотреть сбоку) и микро скопируют. Также существует способ окрашивания культуры жгутиками азотнокислого серебра.