2009.-Byelorussian Pharmacopoeia_Volume 3

Формальдегида 35% раствор

621

На хроматограмме испытуемого раствора

не учитывают пики с площадью менее 0,1 пло-

щади основного пика на хроматограмме раст-

вора сравнения (с) (0,05%).

Вода (2.5.12). Не менее 5,0% и не более 8,5%. Определение проводят из 0,150 г испытуемого образца.

Сульфатная зола (2.4.14, метод А). Не

более 0,2%. Определение проводят из 1,0 г испытуемого образца.

#Остаточные количества органических растворителей (2.4.24). Испытуемый образец

должен выдерживать требования статьи (5.4).

#Микробиологическая чистота (2.6.12, 2.6.13, 5.1.4). Фолиевая кислота в условиях испытания не обладает антимикробным действием.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Жидкостная хроматография (2.2.29), как указано в испытании «Сопутствующие примеси», со

следующими изменениями.

Объем вводимой пробы: по 5 мкл испытуе-

мого раствора и раствора сравнения (а).

ХРАНЕНИЕ

В защищенном от света месте.

ПРИМЕСИ

Специфицированные примеси: А, В, С, D, E, F.

OH CO2H

N

H

H2N

CO2H

А. (2S)-2-[(4-Аминобензоил)амино]пентандио- новая кислота (N-[(4-аминобензоил)-L-глутами-

новая кислота).

O

			N	NH2
		H2N	N	NH2
			H
В. 2,5,6-Триаминопиридин-4(1Н)-он.
	O
	N	N
			H	CO2H
H2N	N	N	N
	H			H
				N
				O H CO2H

С. (2S)-2-[[4-[[(2-Амино-4-оксо-1,4-дигидро- птеридин-7-ил)метил]амино]бензоил]амино]глу- таровая кислота (изофолиевая кислота).

CO2H

	O
		N
	N	N
		H
H2N	N	N
	H

D. 4-[[(2-Амино-4-оксо-1,4-дигидроптеридин- 6-ил)метил]амино]бензойная кислота (птероевая кислота).

			O	H CO2H
	O			N
		N		H
	N	N		CO2H
H2N	N	N	N
	H	N
			NH
		O	N	NH2

Е. (2S)-2-[[4-[Бис[(2-амино-4-оксо-1,4-дигидро-

птеридин-6-ил)метил]амино]бензоил]амино]глу-

таровая кислота.

O

N

N

Cl

H2N	N	N
	H

F. 2-Амино-7-(хлорометил)птеридин-4(1Н)-он.

ФОРМАЛЬДЕГИДА 35% РАСТВОР

Formaldehydi solutio (35 per centum)

FORMALDEHYDE SOLUTION (35 PER CENT)

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Формальдегида 35% раствор содержит не менее 34,5% (м/м) и не более 38,0% (м/м) фор-

мальдегида (СН2О; М.м. 30,03). Содержит метанол в качестве стабилизатора.

ОПИСАНИЕ (СВОЙСТВА)

Прозрачная бесцветная жидкость. Смешивается с водой и с 96% спиртом. При хранении может мутнеть.

ПОДЛИННОСТЬ (ИДЕНТИФИКАЦИЯ)

А. 1 мл раствора S, приготовленного как указано в разделе «Испытания», доводят водой Р до объема 10 мл. К 0,05 мл полученного раствора прибавляют 1 мл раствора 15 г/л хромотроповой кислоты натриевой соли Р, 2 мл воды Р и

8 мл кислоты серной Р. В течение 5 мин появляется фиолетово-синее или фиолетово-красное окрашивание.

В. К 0,1 мл раствора S прибавляют 10 мл воды Р, 2 мл приготовленного непосредственно перед использованием раствора 10 г/л фенилгидразина гидрохлорида Р, 1 мл раствора калия феррицианида Р и 5 мл кислоты хлористоводородной Р. Появляется интенсивное красное

окрашивание.

С. 0,5 мл испытуемого образца смешивают в пробирке с 2 мл воды Р и 2 мл раствора серебра нитрата Р2. К полученному раствору прибавляют раствор аммиака разведенный Р2

до слабощелочной реакции и нагревают на водяной бане. Образуется серый осадок или сере-

бряное зеркало.

622	Государственная фармакопея Республики Беларусь

D. Испытуемый образец выдерживает тре-

бования раздела «Количественное определе-

ние» по количественному содержанию СН2О.

ИСПЫТАНИЯ

Раствор S. 10 мл испытуемого образца при

необходимости фильтруют и доводят водой, свободной от углерода диоксида, Р до объема

50 мл.

Цветность (2.2.2, метод II). Раствор S

должен быть бесцветным.

Кислотность. К 10 мл раствора S прибав-

ляют 1 мл раствора фенолфталеина Р. При

прибавлении не более 0,4 мл 0,1 М раствора натрия гидроксида должно появиться красное окрашивание.

Метанол. Не менее 9,0% (об/об) и не более

15,0% (об/об). Газовая хроматография (2.2.28).

Раствор внутреннего стандарта. 10 мл

этанола Р1 доводят водой Р до объема 100 мл.

Испытуемый раствор. К 10,0 мл испытуемого образца прибавляют 10,0 мл раствора вну-

треннего стандарта и доводят водой Р до объема

100,0 мл.

Раствор сравнения. К 1,0 мл метанола Р

прибавляют 10,0 мл раствора внутреннего стандарта и доводят водой Р до объема 100,0 мл.

Условия хроматографирования:

–колонка стеклянная длинной 1,5—2,0 м

идиаметром 2—4 мм, заполненная сополимером этилвинилбензол-дивинилбензола Р (150— 180 мкм);

–газ-носитель: азот для хроматографии Р;

–скорость газа-носителя: 30—40 мл/мин;

–температура: колонка — 120°С, блок ввода проб — 150°С, детектор — 150°С;

–детектор: пламенно-ионизационный;

–объем вводимой пробы: 1 мкл. Пригодность хроматографической систе-

мы: раствор сравнения:

– разрешение: не менее 2,0 между пиками метанола и этанола.

Сульфатная зола (2.4.14, метод А). Не

более 0,1%. Определение проводят из 1,0 г ис-

пытуемого образца.

#Остаточные количества органических растворителей. Испытуемый образец должен выдерживать требования статьи (5.4).

#Микробиологическая чистота (2.6.12, 2.6.13, 5.1.4). Формальдегида 35% раствор в условиях испытания обладает антимикробным действием. Посев на питательные среды № 1 и

№3 проводят из разведения 1:100, на питательную среду № 2 — из разведения 1:50, на пита-

тельную среду № 8 — из разведения 1:20.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

1,000 г испытуемого раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, содержащую 2,5 мл воды Р и 1 мл раствора натрия гидроксида разведенного Р, встряхивают и доводят водой Р до объема 100,0 мл. К 10,0 мл по-

лученного раствора прибавляют 30,0 мл 0,05 М раствора йода, перемешивают и прибавляют 10 мл раствора натрия гидроксида разведенного Р. Выдерживают в течение 15 мин, при-

бавляют 25 мл кислоты серной разведенной Р, 2 мл раствора крахмала Р и титруют 0,1 М раствором натрия тиосульфата.

1 мл 0,05 М раствора йода соответствует

1,501 мг СН2О.

ХРАНЕНИЕ

В защищенном от света месте при темпера-

туре от 15°С до 25°С.

ФРАМИЦЕТИНА СУЛЬФАТ

Framycetini sulfas

FRAMYCETIN SULPHATE

H2N

HO

NH2

HO

O

O

O

O

x H2SO4

OH

NH2

OH NH2

HO

O

O

HO

HO

NH2

NH2

C23H46N6O13 · хН2SO4

М.м. 615 (основание)

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Фрамицетина сульфат представляет собой 2-дезокси-4-О-(2,6-диамино-2,6-дидезокси-α-D- глюкопиранозил)-5-О-[3-О-(2,6-диамино-2,6-диде- зокси-β-L-идопиранозил)-β-D-рибофуранозил]- D-стрептамина сульфат (неомицин В).

Субстанция продуцируется определенными штаммами Streptomyces fradiae или Streptomyces decaris или получают другими способами.

Содержание: не менее 630 МЕ/мг в пересчете на сухое вещество.

ОПИСАНИЕ (СВОЙСТВА)

Белый или желтовато-белый порошок. Гигроскопичен.

Легкорастворим в воде, очень мало растворим в 96% спирте, практически нерастворим в ацетоне.

ПОДЛИННОСТЬ (ИДЕНТИФИКАЦИЯ)

А. Просматривают хроматограммы, полученные в испытании «Сопутствующие примеси» или «# Примесь С».

Результаты:

– основной пик на хроматограмме испытуемого раствора по времени удерживания соответствует основному пику на хроматограмме раствора сравнения (а); # на хроматограмме испытуемого раствора обнаруживается основное пятно, соответствующее основно-

Фрамицетина сульфат

623

му пятну на хроматограмме раствора сравне-

ния (а);

– выдерживает испытание на содержание

примеси С.

В. Испытуемый образец дает реакцию (а) на сульфаты (2.3.1).

ИСПЫТАНИЯ

рН (2.3.3). От 6,0 до 7,0. 0,1 г испытуемого образца растворяют в воде, свободной от углерода диоксида, Р и доводят до объема

10 мл этим же растворителем.

Удельное оптическое вращение (2.2.7).

От +52,5 до +55,5 в пересчете на сухое вещество. 1,00 г испытуемого образца растворяют в воде Р и доводят до объема 10,0 мл этим же

растворителем.

Сопутствующие примеси. Жидкостная хроматография (2.2.29).

Испытуемый раствор. 25,0 мг испытуемого

образца растворяют в подвижной фазе и дово-

дят до объема 50,0 мл этим же растворителем.

Раствор сравнения (а). Содержимое контейнера с ФСО фрамицетина сульфатом

растворяют в подвижной фазе и доводят этим же растворителем до получения раствора с

концентрацией 0,5 мг/мл.

Раствор сравнения (b). 3,0 мл раствора сравнения (a) доводят подвижной фазой до объема 100,0 мл.

Раствор сравнения (с). 1,0 мл раствора сравнения (a) доводят подвижной фазой до объема 100,0 мл.

Раствор сравнения (d). Содержимое кон-

тейнера ФСО неамина (соответствует 0,5 мг) растворяют в подвижной фазе и доводят до объема 100,0 мл этим же растворителем.

Раствор сравнения (е). 10 мг ФСО неомицина сульфата растворяют в подвижной

фазе и доводят до объема 100,0 мл этим же растворителем.

Условия хроматографирвоания:

–колонка длиной 0,25 м и внутренним ди-

аметром 4,6 мм, заполненная силикагелем октадецилсилильным, деактивированным по отношению к основаниям, для хроматографии Р с размером частиц 5 мкм;

–температура: 25°С;

–подвижная фаза: смешивают 20,0 мл

кислоты трифторуксусной Р, 6,0 мл раствора натрия гидроксида, свободного от карбонатов, Р и 500 мл воды Р, выдерживают до

установления равновесия, доводят водой Р

до объема 1000 мл и дегазируют;

–скорость подвижной фазы: 0,7 мл/мин;

–постколоночный раствор: раствор натрия гидроксида, свободного от карбонатов Р, предварительно дегазированный и разведенный в 25 раз, который подают безымпульсным потоком в колоночный элюент с использованием полимерного смешивающего змеевика объемом 375 мкл;

–скорость постколоночного раствора:

0,5 мл/мин;

–амперометрический детектор, рабо-

тающий в импульсном режиме, с золотым рабочим электродом, хлорсеребряным элек-

тродом сравнения и вспомогательным элек-

тродом из нержавеющей стали, с потенциалами детектирования 0,00 В, окисления

+0,80 В и восстановления -0,60 В соответ-

ственно, с импульсной продолжительностью

всоответствии с используемым оборудова-

нием;

–объем вводимой пробы: 10 мкл;

–время хроматографирования: 1,5-крат- ное время удерживания неомицина В.

Относительное удерживание (по от-

ношению к неомицину В; время удержива-

ния — около 10 мин): примесь А — около 0,65; примесь С — около 0,9; примесь G — около 1,1.

Пригодность хроматографической системы:

–разрешение: не менее 2,0 между

пиками примеси С и неомицина В на хрома-

тограмме раствора сравнения (е); при необходимости изменяют содержание раствора натрия гидроксида, свободного от карбона-

тов, в подвижной фазе;

–отношение сигнал/шум: не менее 10

для основного пика на хроматограмме раствора сравнения (с).

Предельное содержание примесей:

— примесь А (не более 1,0 %): на хроматограмме испытуемого раствора площадь пика, соответствующего примеси А, не должна превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (d)

(при расчете учитывают содержание неами-

на в ФСО неамина);

–примесь С (не более 3,0 %): на хроматограмме испытуемого раствора площадь пика, соответствующего примеси С, не должна превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (b);

– сумма других примесей (не более

3,0 %): на хроматограмме испытуемого раст-

вора сумма площадей всех пиков, кроме основного и пиков примеси А и С, не должна превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (b).

На хроматограмме испытуемого раствора не учитывают пики с площадью менее

площади основного пика на хроматограмме

раствора сравнения (с) (1,0 %).

#Испытания «Примесь А» и «Примесь С» используются в качестве альтернативных испытанию «Сопутствующие примеси».

#Примесь А. Не более 1 %. Тонкослойная хроматография (2.2.27).

Испытуемый раствор. 0,250 г испытуемого образца растворяют в воде Р и доводят

до объема 10,0 мл этим же растворителем.

624	Государственная фармакопея Республики Беларусь

Раствор сравнения (а). 0,5 мг ФСО неамина растворяют в 2,0 мл воды Р.

Раствор сравнения (b). 0,5 мл испытуе-

мого раствора смешивают с 0,5 мл раствора сравнения (а).

Пластинка: ТСХ пластинка со слоем силикагеля Н Р.

Подвижная фаза: метиленхлорид Р — раствор аммиака концентрированный Р — метанол Р (10:20:30, об/об/об).

Наносимый объем пробы: 5 мкл.

Фронт подвижной фазы: не менее 8 см

от линии старта.

Высушивание: при температуре от 100°С до 105°С в течение 10 мин.

Проявление: пластинку опрыскивают реактивом нингидрина и олова (II) хлорида Р

и нагревают при температуре 110°С в тече-

ние15 мин. Пластинку снова опрыскивают реактивом нингидрина и олова (II) хлорида Р и

нагревают при температуре 110°С в течение

15 мин.

Пригодность хроматографической системы: раствор сравнения (b):

– на хроматограмме обнаруживаются два

полностью разделенных основных пятна. Результаты: на хроматограмме испыту-

емого раствора любое пятно, соответствующее неамину, должно быть не интенсивнее пятна на хроматограмме раствора сравне-

ния (а).

# Примесь С. Не более 3 %. Тонкослойная хроматография (2.2.27).

Испытуемый раствор. 40 мг испытуемого образца растворяют в воде Р и доводят до объема 5,0 мл этим же растворителем.

Раствор сравнения (а). 40 мг ФСО фрамицетина сульфата растворяют в воде Р и

доводят до объема 5,0 мл этим же растворителем.

Раствор сравнения (b). 30 мг ФСО фрамицетина сульфата растворяют в воде Р и

доводят до объема 25,0 мл этим же растворителем. 5,0 мл полученного раствора доводят водой Р до объема 25,0 мл.

Раствор сравнения (с). 40 мг ФСО неомицина сульфата растворяют в воде Р и

доводят до объема 5,0 мл этим же растворителем.

Пластинка: ТСХ пластинка со слоем подходящего силикагеля.

Подвижная фаза: метанол Р — раствор 200 г/л натрия хлорида Р (20:80, об/об).

Наносимый объем пробы: по 5 мкл в виде полос.

Фронт подвижной фазы: не менее 12 см

от линии старта.

Высушивание: при температуре от 100°С до 105°С в течение 10 мин.

Проявление: пластинку опрыскивают раствором нингидрина Р1 и сушат при температуре от 100°С до 105°С в течение10 мин.

Пригодность хроматографической системы: раствор сравнения (с):

– на хроматограмме обнаруживается

пятно со значением Rf, меньшим чем значе-

ние Rf основного пятна.

Результаты: на хроматограмме испы-

туемого раствора пятно, соответствующее

неомицину С (значение Rf меньшее, чем зна-

чение Rf основного пятна), должно быть не интенсивнее пятна на хроматограмме раствора сравнения (b) (3 %).

Сульфаты. Не менее 27,0 % и не более

31,0 % в пересчете на сухое вещество.

0,250 г испытуемого образца растворяют в 100 мл воды Р и доводят до рН 11 раствором аммиака концентрированным Р. Прибавляют 10,0 мл 0,1 М раствора бария хлорида, около 0,5 мг фталеинового пурпурного Р и титруют 0,1 М раствором натрия эдетата;

в момент изменения окраски раствора прибавляют 50 мл 96 % спирта Р и продолжа-

ют титрование до исчезновения фиолетово-

синего окрашивания.

1 мл 0,1 М раствора бария хлорида соответствует 9,606 мг SO4.

Потеря в массе при высушивании

(2.2.32). Не более 8,0 %. 1,000 г испытуемо-

го образца сушат над фосфора (V) оксидом Р при температуре 60°С и давлении, не превышающем 0,7 кПа, в течение 3 ч.

Сульфатная зола (2.4.14, метод А). Не

более 1,0 %. Определение проводят из 1,0 г испытуемого образца.

Стерильность (2.6.1). Если субстанция предназначена для производства лекарственных средств для внутриполостно-

го введения без дополнительной процедуры стерилизации, то она должна выдерживать

испытание на стерильность.

Бактериальные эндотоксины (2.6.14, метод D). Менее 1,3 МЕ/мг, если субстанция предназначена для производства лекарственных средств для внутриполостного введения без дополнительной процедуры удаления бактериальных эндотоксинов.

#Остаточные количества органических растворителей (2.4.24). Испытуемый образец должен выдерживать требования статьи (5.4).

#Микробиологическая чистота (2.6.12, 2.6.13, 5.1.4). Фрамицетина сульфат в условиях испытания обладает антимикробным действием. Посев на питательную среду № 2 проводят из разведения 1:10. Посев на питательные среды № 1, № 8 и № 11 проводят для исключения возможности присутствия устойчивых к фрамицетина сульфату штам-

мов микроорганизмов из разведения 1:50.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Микробиологический метод (2.7.2). В качестве стандартного образца используют

ФСО фрамицетина сульфата.

# Фуразолидон

625

ХРАНЕНИЕ

В воздухонепроницаемом контейнере в

защищенном от света месте.

Если субстанция предназначена для про-

изводства лекарственных средств для вну-

триполостного введения — в стерильном кон-

тейнере с контролем первого вскрытия.

МАРКИРОВКА

При необходимости указывают:

–субстанция стерильна;

–субстанция не содержит бактериальных эндотоксинов.

ПРИМЕСИ

HO NH2

R2

HO

O

OH

HN R1

HO O

NH2

A.R1 = H, R2 = NH2: 2-Дезокси-4-O-(2,6- диамино-2,6-дидезокси-α-D-глюкопиранозил)-D-

стрептамин (неамин или неомицин A-LP).

B.R1 = CO-CH3, R2 = NH2: 3-N-Ацетил-2-

дезокси-4-O-(2,6-диамино-2,6-дидезокси-α-D- глюкопиранозил)-D-стрептамин (3-ацетилнеамин).

D.R1 = H, R2 = OH: 4-O-(2-Амино-2-дезокси-

α-D-глюкопиранозил)-2-дезокси-D-стрептамин (паромамин или неомицин D).

			R4	HO	NH2
R1	HO		O
				O
	O		O
R2				OH	HN R3
OH		O	HO	O
HO			HO	NH2
	NH2

C.R1 = CH2-NH2, R2 = R3 =H, R4 = NH2: 2-Дезокси-4-O-(2,6-диамино-2,6-дидезокси- α-D-глюкопиранозил)-5-O-[3-O-(2,6-диамино-

2,6-дидезокси-α-D-глюкопиранозил)-β-D-

рибофуранозил]-D-стрептамин (неомицин C).

E.R1 = R3 = H, R2 = CH2-NH2, R4 = OH: 4-O-(2-Амино-2-дезокси-α-D-глюкопиранозил)- 2-дезокси-5-O-[3-O-(2,6-диамино-2,6-дидезокси- β-L-идопиранозил)-β-D-рибофуранозил]-D- стрептамин (паромомицин I или неомицин E).

F.R1 = CH2-NH2, R2 = R3 = H, R4 = OH: 4-O-(2-Амино-2-дезокси-α-D-глюкопиранозил)- 2-дезокси-5-O-[3-O-(2,6-диамино-2,6-дидезокси- α-D-глюкопиранозил)-β-D-рибофуранозил]-D-

стрептамин (паромомицин II или неомицин F).

G.R1=H,R2=CH2-NH2,R3=CO-CH3,R4=NH2: 3-N-Ацетил-2-дезокси-4-O-(2,6-диамино-2,6- дидезокси-α-D-глюкопиранозил)-5-O-[3-O-(2,6- диамино-2,6-дидезокси-β-L-идопиранозил)-β-D- рибофуранозил]-D-стрептамин (неомицин B-LP).

# ФУРАЗОЛИДОН

Furazolidonum

FURAZOLIDONE

	O2N	N
	O
		N

O	O

C8H7N3O5

М.м. 225,2

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Фуразолидон содержит не менее 97,0% и

не более 103,0% 3-(5-нитрофурфурилиденами-

но)оксазолидин-2-она в пересчете на сухое вещество.

ОПИСАНИЕ (СВОЙСТВА)

Желтый кристаллический порошок.

Очень мало растворим в воде и в 96% спирте, малорастворим в хлороформе, практи-

чески нерастворим в эфире.

ПОДЛИННОСТЬ (ИДЕНТИФИКАЦИЯ)

А. Абсорбционная спектрофотометрия в инфракрасной области (2.2.24).

Приготовление: в дисках.

Сравнение: ФСО фуразолидона или спектр, представленный на рисунке 1.

В.1 мг испытуемого образца растворяют

в1 мл диметилформамида Р и прибавляют

0,05 мл 1 М раствора калия гидроксида спиртового раствора. Появляется темно-голубое окрашивание.

ИСПЫТАНИЯ

Температура плавления (2.2.14). От 257°С до 259°С.

рН (2.2.3). От 4,5 до 7,0. 1 г испытуемого образца встряхивают с 100 мл воды, свободной от углерода диоксида Р, в течение 15 мин и фильтруют.

Нитрофурфураля диацетат. Не более

1,0%. Тонкослойная хроматография (2.2.27).

Испытание проводят с защитой от яркого света.

Испытуемый раствор. 50 мг испытуемого образца растворяют в 5 мл диметилформамида Р при нагревании на водяной бане в течение нескольких минут, охлаждают и доводят ацетоном Р до объема 10 мл.

Раствор сравнения. 5,0 мг ФСО нитрофурфураля диацетата растворяют в смеси из равных объемов диметилформамида Р и ацетона Р и доводят до объема 50,0 мл этим же растворителем.

Пластинка: ТСХ пластинка со слоем силикагеля G Р.

626	Государственная фармакопея Республики Беларусь

Подвижная фаза: толуол Р — диоксан Р

(95:5, об/об).

Наносимый объем пробы: 20 мкл испытуе-

мого раствора и 10 мкл раствора сравнения.

Фронт подвижной фазы: не менее 3/4 высоты пластинки.

Высушивание: при температуре 105°С в те-

чение 5 мин.

Проявление: горячую пластинку опрыскивают раствором фенилгидразина гидрохлорида Р.

Результаты: на хроматограмме испытуе-

мого раствора пятно, соответствующее нитро-

фураля диацетату, должно быть не интенсив-

нее соответствующего пятна на хроматограмме раствора сравнения.

Потеря в массе при высушивании

(2.2.32). Не более 0,5%. 1,000 г испытуемого об-

разца сушат при температуре 105°С.

Сульфатная зола (2.4.14, метод А). Не более 0,1%. Определение проводят из 1,0 г ис-

пытуемого образца.

Остаточные количества органических растворителей (2.4.24). Испытуемый образец должен выдерживать требования статьи (5.4).

Микробиологическая чистота (2.6.12,

2.6.13, 5.1.4). Фуразолидон в условиях испыта-

ний обладает антимикробным действием. Для

устранения антимикробного действия посев на питательные среды проводят методом мембранной фильтрации.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Испытание проводят с защитой от света.

К 80 мг испытуемого образца прибавляют

150 мл диметилформамида Р, перемешивают

до полного растворения и доводят водой Р до объема 500,0 мл. 5,0 мл полученного раствора

доводят водой Р до объема 100,0 мл. Измеряют оптическую плотность (2.2.25) полученного

раствора в максимуме при 367 нм. Содержание C8H7N3O5 рассчитывают с

учетом удельного показателя поглощения, равного 750.

ХРАНЕНИЕ

В защищенном от света месте.

ФУРОСЕМИД

Furosemidum

FUROSEMIDE

OO

S	CO2H
H2N
Cl	N
	H
	O
C12H11ClN2O5S	М.м. 330,7

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Фуросемид содержит не менее 98,5% и не

более 101,0% 4-хлор-2-[(фуран-2-илметил)-

Пропускание

100

95

90

85

80

75

70

65

60

55

50

45

40

35

30

25

20

15

3000

2000

1500

1000

500

Волновое число (см-1)

Рисунок 1. Инфракрасный спектр пропускания ФСО фуразолидона в дисках с калия бромидом Р.

Фуросемид

627

амино]-5-сульфамоилбензойной кислоты в пе-

ресчете на сухое вещество.

ОПИСАНИЕ (СВОЙСТВА)

Белый или почти белый кристаллический порошок.

Практически нерастворим в воде, растворим в ацетоне, умеренно растворим в 96% спирте, практически нерастворим в метиленхлориде. Растворяется в разведенных растворах гидроксидов щелочных металлов.

Температура плавления: около 210°С с разложением.

ПОДЛИННОСТЬ (ИДЕНТИФИКАЦИЯ)

Первая идентификация: В. Вторая идентификация: А, С.

А. Абсорбционная спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях (2.2.25).

Испытуемый раствор. 50 мг испытуемого

образца растворяют в растворе 4 г/л натрия гидроксида Р и доводят до объема 100 мл этим же

растворителем. 1 мл полученного раствора доводят раствором 4 г/л натрия гидроксида Р до объема 100 мл.

Диапазон длин волн: от 220 нм до 350 нм. Максимум поглощения: при 228 нм, при

270 нм и при 333 нм.

Отношение оптических плотностей:

А270/А228 — от 0,52 до 0,57.

В. Абсорбционная спектрофотометрия в ин-

фракрасной области (2.2.24).

Сравнение: ФСО фуросемида # или спектр,

представленный на рисунке 1.

С. 25 мг испытуемого образца растворяют в

10 мл 96% спирта Р. К 5 мл полученного раст-

вора прибавляют 10 мл воды Р. К 0,2 мл полученного раствора прибавляют 10 мл кислоты хлористоводородной разведенной Р и нагревают с обратным холодильником в течение 15 мин. Охлаждают, прибавляют 18 мл 1 М раствора натрия гидроксида и 1 мл раствора 5 г/л

натрия нитрита Р. Выдерживают в течение 3 мин, прибавляют 2 мл раствора 25 г/л кислоты сульфаминовой Р, перемешивают и прибавляют 1 мл раствора 5 г/л нафтилэтилендиамина дигидрохлорида Р. Появляется

фиолетово-красное окрашивание.

ИСПЫТАНИЯ

Сопутствующие примеси. Жидкостная

хроматография (2.2.29). Растворы готовят непосредственно перед использованием, испытание проводят с защитой от света.

Испытуемый раствор. 50,0 мг испытуемого

образца растворяют в подвижной фазе и доводят до объема 50,0 мл этим же растворителем.

Раствор сравнения (а). 2,0 мг ФСО фуросемида примеси А растворяют в подвижной фазе и доводят до объема 2,0 мл этим же растворителем.

Раствор сравнения (b). 1,0 мл испытуемого раствора и 1,0 мл раствора сравнения (а) дово-

дят подвижной фазой до объема 20,0 мл. 1,0 мл

полученного раствора доводят подвижной фазой до объема 20,0 мл.

Условия хроматографирования:

– колонка длиной 0,25 м и внутренним диаметром 4,6 мм, заполненная силикагелем

Пропускание

95

90

85

80

75

70

65

60

55

50

45

40

3000	2000	1500	1000
	Волновое	число (см-1)

Рисунок 1. Инфракрасный спектр пропускания ФСО фуросемида.

628	Государственная фармакопея Республики Беларусь

октилсилильным для хроматографии Р с раз-

мером частиц 5 мкм;

–подвижная фаза: 0,2 г калия дигидрофосфата Р и 0,25 г цетримида Р растворяют в 70 мл воды Р, доводят до рН 7,0 раствором аммиака Р и прибавляют 30 мл пропанола Р;

–скорость подвижной фазы: 1 мл/мин;

–спектрофотометрический детектор, длина волны 238 нм;

–объем вводимой пробы: по 20 мкл испыту-

емого раствора и раствора сравнения (b);

–время хроматографирования: 3-кратное

время удерживания фуросемида.

Пригодность хроматографической системы: раствор сравнения (а):

–разрешение: не менее 4 между пиками

примеси А (первый пик) и фуросемида (второй

пик).

Предельное содержание примесей:

–примеси А, В, С, D, Е (не более 0,25%): на

хроматограмме испытуемого раствора площадь

любого пика, кроме основного, не должна пре-

вышать площадь пика примеси А на хроматограмме раствора сравнения (b);

–сумма примесей (не более 0,5%): на хроматограмме испытуемого раствора сумма пло-

щадей всех пиков, кроме основного, не должна

превышать 2-кратную площадь пика примеси А на хроматограмме раствора сравнения (b).

На хроматограмме испытуемого раствора не учитывают пики с площадью менее 0,1 пло-

щади пика примеси А на хроматограмме раствора сравнения (b) (0,025%).

Хлориды (2.4.4). Не более 0,02% (200 ppm). К 0,5 г испытуемого образца прибавляют смесь из 0,2 мл кислоты азотной Р и 30 мл

воды дистиллированной Р и встряхивают в течение 5 мин. Выдерживают в течение 15 мин и фильтруют.

Сульфаты (2.4.13). Не более 0,03% (300 ppm). К 1,0 г испытуемого образца прибавляют смесь из 0,2 мл кислоты уксусной Р и

30 мл воды дистиллированной Р и встряхивают

втечение 5 мин. Выдерживают в течение 15 мин

и фильтруют.

Тяжелые металлы (2.4.8, метод С). Не более 0,002% (20 ppm). 1,0 г испытуемого образца должен выдерживать испытание на тяжелые металлы. Эталон готовят с использованием 2 мл

эталонного раствора свинца (10 ppm Pb) P.

Потеря в массе при высушивании (2.2.32). Не более 0,5%. 1,000 г испытуемого образца

сушат при температуре 105°С.

Сульфатная зола (2.4.14, метод А). Не более 0,1%. Определение проводят из 1,0 г испытуемого образца.

#Остаточные количества органических растворителей (2.4.24). Испытуемый образец должен выдерживать требования статьи (5.4).

#Микробиологическая чистота (2.6.12,

2.6.13, 5.1.4). Фуросемид в условиях испытания не обладает антимикробным действием.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

0,250 г испытуемого образца растворяют в

20 мл диметилформамида Р и титруют 0,1 М раствором натрия гидроксида, используя в ка-

честве индикатора 0,2 мл раствора бромтимолового синего Р2.

Параллельно проводят контрольный опыт.

1 мл 0,1 М раствора натрия гидроксида соответствует 33,07 мг C12H11ClN2O5S.

ХРАНЕНИЕ

В защищенном от света месте.

ПРИМЕСИ

Специфицированные примеси: А, В, С, D, Е.

OO

S CO2H

H2N

O

N Cl

H

А. 2-Хлор-4-[(фуран-2-илметил)амино]-5-суль- фамоилбензойная кислота.

R2 CO2H

Cl R1

В. R1 = Cl, R2 = SO2-NH2: 2,4-Дихлор-5- сульфамоилбензойная кислота.

С. R1 = NH2, R2 = SO2-NH2: 2-Амино-4-хлор- 5-сульфамоилбензойная кислота.

E. R1 = Cl, R2 = H: 2,4-Дихлорбензойная кислота.

OO

S	CO2H
H2N
O	N
N
H	H
	O

D.2,4-Бис[(фуран-2-илметил)амино]-5-сульфа- моилбензойная кислота.

ХИМОТРИПСИН

Chymotrypsinum

CHYMOTRYPSIN

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Химотрипсин представляет собой протеолитический фермент, получаемый активацией химотрипсиногена, экстрагируемого из поджелудочной железы крупного рогатого скота (Bos taurus L.). Активность: не менее 5,0 микрокатал/мг. В растворе при рН около 8 обладает максимальной ферментативной активностью; активность обратимо ингибируется при рН 3; при значении рН 3 химотрипсин является наиболее стабильным.

ПРОИЗВОДСТВО

Животные, используемые для получения химотрипсина, должны выдерживать требования, предъявляемые к здоровью животных, используемых человеком в пищу. Кроме того, используемые ткани не должны содержать опасные веще-

Химотрипсин

629

ства в соответствии с международным или наци-

ональным законодательством.

Метод производства должен быть валиди-

рован, чтобы при испытании субстанция отвечала следующему требованию.

Гистамин (2.6.10). Не более 1 мкг (в пере-

счете на основание гистамина) на 5 микрокатал

химотрипсиновой активности. Перед проведением испытания раствор испытуемого образца на-

гревают на водяной бане в течение 30 мин.

ОПИСАНИЕ (СВОЙСТВА)

Белый или почти белый кристаллический или аморфный порошок. Аморфная форма является гигроскопичной.

Умеренно растворим в воде.

ПОДЛИННОСТЬ (ИДЕНТИФИКАЦИЯ)

А. 1 мл раствора S, приготовленного как ука-

зано в разделе «Испытания», доводят водой Р

до объема 10 мл. В лунке белой пластинки для

капельных реакций смешивают 0,05 мл получен-

ного раствора и 0,2 мл раствора субстрата. По-

является красновато-фиолетовое окрашивание.

Раствор субстрата. К 24,0 мг ацетилтирозина этилового эфира Р прибавляют 0,2 мл

96% спирта Р и перемешивают до растворения. Прибавляют 2,0 мл 0,067 М раствора фосфатного буфера рН 7,0 и 1 мл смешанного раствора метилового красного Р и доводят водой Р

до объема 10,0 мл.

B. 0,5 мл раствора S доводят водой Р до объема 5 мл и прибавляют 0,10 мл раствора 20 г/л

тозилфенилананилхлорметана Р в 96% спирте Р. Доводят до рН 7,0 и встряхивают в течение 2 ч.

В лунке белой пластинки для капельных реакций

смешивают 0,05 мл полученного раствора и 0,2 мл раствора субстрата, приготовленного как указано в идентификации А. В течение 3 мин после сме-

шивания не появляется окрашивание.

ИСПЫТАНИЯ

Раствор S. 0,10 г испытуемого образца растворяют в воде, свободной от углерода диоксида, Р и доводят до объема 10,0 мл этим же растворителем.

Прозрачность (2.2.1). Раствор S по степени

мутности не должен превышать эталон II.

рН (2.2.3). От 3,0 до 5,0. Измеряют

рН раствора S.

Оптическая плотность (2.2.25). 30,0 мг испытуемого образца растворяют в 0,001 М растворе кислоты хлористоводородной и доводят до

объема 100,0 мл этим же растворителем. Спектр

поглощения испытуемого раствора должен иметь максимум при 281 нм и минимум при 250 нм. Удельный показатель поглощения в максимуме — от 18,5 до 22,5; в минимуме — не более 8.

Трипсин.

Раствор субстрата. К 98,5 мг тозиларгинина метилового эфира гидрохлорида Р прибав-

ляют 5 мл трис(гидроксиметил)аминометанбуферного раствора рН 8,1 и перемешивают до растворения. К полученному раствору прибав-

ляют 2,5 мл смешанного раствора метилового красного Р и доводят водой Р до объема 25,0 мл.

Испытуемый раствор. В лунке белой пластинки для капельных реакций смешивают

0,05 мл трис(гидроксиметил)аминометанбуферного раствора рН 8,1 Р и 0,1 мл раствора S и прибавляют 0,2 мл раствора субстрата.

Раствор сравнения. Готовят аналогично ис-

пытуемому раствору и в то же самое время, ис-

пользуя испытуемый образец, к которому прибавляют не более 1% (м/м) БСП трипсина.

В испытуемом растворе в течение 3—5 мин

после смешивания не должно появляться окра-

шивание. В растворе сравнения появляется

красновато-фиолетовое окрашивание.

Потеря в массе при высушивании (2.2.32).

Не более 5,0%. 0,100 г испытуемого образца сушат при температуре 60°С и давлении, не пре-

вышающем 0,7 кПа, в течение 2 ч.

#Остаточные количества органических растворителей (2.4.24). Испытуемый образец должен выдерживать требования статьи (5.4).

#Микробиологическая чистота (2.6.12, 2.6.13, 5.1.4). Химотрипсин в условиях испыта-

ния не обладает антимикробным действием.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Активность испытуемого образца определя-

ют, сравнивая скорость, с которой он гидролизует ацетилтирозина этиловый эфир Р, со ско-

ростью, с которой БСП химотрипсина гидролизует этот же субстрат в этих же условиях.

Прибор. Используют реакционный сосуд

вместимостью около 30 мл, снабженный:

–устройством, поддерживающим темпера-

туру (25,0±0,1)°С;

–устройством для перемешивания (например, магнитной мешалкой);

–крышкой с отверстиями для электродов, наконечника бюретки, трубки для подвода азота

иприбавления реактивов.

Может быть использована автоматическая

или ручная установка для титрования. В послед-

нем случае бюретку градуируют делениями по 0,005 мл; используют рН-метр с широким диапазоном, снабженный стеклянным ионселективным электродом и каломельным или хлорсеребряным электродами сравнения.

Испытуемый раствор. 25,0 мг испытуемого образца растворяют в 0,001 М растворе кислоты хлористоводородной и доводят до объема

250,0 мл этим же растворителем.

Раствор сравнения. Растворяют 25,0 мг БСП химотрипсина в 0,001 М растворе кислоты хлористоводородной и доводят до объема 250,0 мл этим же растворителем.

Растворы хранят при температуре от 0°С до 5°С. 1 мл каждого раствора нагревают до темпе-

ратуры около 25°С в течение 15 мин и исполь-

630	Государственная фармакопея Республики Беларусь

зуют 50 мкл каждого раствора (соответствует

около 25 нанокатал) для каждого титрования.

Титрование проводят в атмосфере азота.

10,0 мл 0,01 М раствора кальция хлорида Р

помещают в реакционный сосуд и при перемеши-

вании прибавляют 0,35 мл 0,2 М раствора ацетилтирозина этилового эфира Р. Когда температура установится в пределах (25,0±0,1)°С

(приблизительно через 5 мин), доводят до рН 8,0

0,02 М раствором натрия гидроксида. Прибав-

ляют 50 мкл испытуемого раствора (соответству-

ет около 5 мкг испытуемого образца) и начинают

отсчет времени. Поддерживают рН 8,0, прибавляя 0,02 М раствор натрия гидроксида, отмечая прибавленный объем каждые 30 с. Рассчи-

тывают использованный объем 0,02 М раствора натрия гидроксида в секунду между 30 и 210 секундой титрования. Аналогично проводят титро-

вание с использованием раствора сравнения и

рассчитывают использованный объем 0,02 М раствора натрия гидроксида в секунду.

Активность в микрокатал на миллиграмм рассчитывают по формуле:

m′ V A , m V ′

где:

m — масса навески испытуемого образца, мг; m’ — масса навески БСП химотрипсина, мг;

V — объем 0,02 М раствора натрия гидроксида, пошедший на титрование испытуе-

мого раствора в секунду;

V’ — объем 0,02 М раствора натрия гидроксида, пошедший на титрование раствора сравнения в секунду;

А — активность БСП химотрипсина, в ми-

крокатал на миллиграмм.

ХРАНЕНИЕ

В воздухонепроницаемом контейнере в защищенном от света месте при температуре от 2°С до 8°С.

МАРКИРОВКА

Указывают:

–количество химотрипсина и общую актив-

ность в микрокатал на контейнер;

–для аморфного химотрипсина — «гигроскопичен».

ХЛОРАЛГИДРАТ

Chlorali hydras

CHLORAL HYDRATE

	OH
Cl3C		OH
C2H3Cl3O2		М.м. 165,4

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Хлоралгидрат содержит не менее 98,5% и

не более 101,0% 2,2,2-трихлорэтан-1,1-диола.

ОПИСАНИЕ (СВОЙСТВА)

Бесцветные прозрачные кристаллы.

Очень легко растворим в воде, легкораство-

рим в 96% спирте.

ПОДЛИННОСТЬ (ИДЕНТИФИКАЦИЯ)

А. К 10 мл раствора S, приготовленного как

указано в разделе «Испытания», прибавляют

2 мл раствора натрия гидроксида разведенного Р. Раствор мутнеет, при нагревании появляется запах хлороформа.

В. К 1 мл раствора S прибавляют 2 мл

раствора натрия сульфида Р. Появляется

желтое окрашивание, быстро переходящее в

красновато-коричневое. При выдерживании в течение небольшого промежутка времени может

образоваться красный осадок.

ИСПЫТАНИЯ

Раствор S. 3,0 г испытуемого образца растворяют в воде, свободной от углерода диоксида, Р и доводят до объема 30 мл этим же раст-

ворителем.

Прозрачность (2.2.1). Раствор S должен быть прозрачным.

Цветность (2.2.2, метод II). Раствор S

должен быть бесцветным.

рН (2.2.3). От 3,5 до 5,0. Измеряют рН раствора S.

Хлоралалкоголят. К 1,0 г испытуемого образца прибавляют 10 мл раствора натрия гидроксида разведенного Р и нагревают. Надоса-

дочный слой фильтруют, к фильтрату прибавляют по каплям 0,05 М раствор йода до появления желтого окрашивания. Выдерживают в течение

1 ч. Не должно образовываться осадка.

Хлориды (2.4.4). Не более 0,01% (100 ppm). 5 мл раствора S доводят водой Р до объема 15 мл.

Тяжелые металлы (2.4.8, метод А). Не более 0,002% (20 ррm). 10 мл раствора S дово-

дят водой Р до объема 20 мл. Полученный раствор должен выдерживать испытание на тяжелые металлы. Эталон готовят с использованием эталонного раствора свинца (1 ppm Pb) P.

Нелетучий остаток. Не более 0,1%. 2,000 г

испытуемого образца выпаривают на водя-

ной бане досуха. Масса полученного остатка не должна превышать 2 мг.

#Остаточные количества органических растворителей (2.4.24). Испытуемый образец

должен выдерживать требования статьи (5.4).

#Микробиологическая чистота (2.6.12, 2.6.13, 5.1.4). Хлоралгидрат в условиях испытания обладает антимикробным действием. Посев на питательные среды № 3 и № 8 проводят из разведения 1:20, на питательную среду № 2 —

из разведения 1:50, на питательную среду

№ 1 — из разведения 1:100.