3. Визначення та регуляція статей у ссавців.

Відомо (Amman, Seidel, 1982; Libbus, Johnson, 1988), що індукція статі нащадків у ссавців обумовлена наявністю в чоловічих гаметах «Х» або «У» хромосом, які обумовлюють при заплідненні яйцеклітини, відповідно жіночу «ХХ» або чоловічу «ХУ» стать, так як жіноча гамета завжди несе «Х» хромосому

Багато дослідників намагалися розділити популяцію сперміїв на групи клітин – носіїв «Х» і «У» хромосом шляхом електрофорезу, седиментації, гравітації, імунної нейтралізації. Але при цьому великих успіхів не було досягнуто. Проте було встановлено (Moruzzi J.F.,1979), що кількість ДНК в сперміях – носіях «Х» – хромосоми завжди більше, ніж в сперміях – носіях «У»– хромосоми. Ця різниця для сперми кнура складає 3,4 %, бугая – 3,8 %, барана – 4,2 % (Johnson, 1992).

Базуючись цією різницею (Johnson, Spring, 1992) було запропоновано метод попереднього відбору гамет за статтю, який дозволяє в 81...94 % випадках отримувати нащадків бажаної статті. Цей метод полягає в тому, що після фарбування флюорохромом голівки сперміїв, які не мають хвостиків пропускають через поточний цитометр з лазерним сортером, принцип дії якого представлено на рис. 3. Розділені за статтю голівки сперміїв використовують для запліднення яйцеклітин in vitro шляхом мікроін'єкції.

Рис. 3. Лазерний сортер для розділення суспензій сперміїв на

«Х» і «у» хромосоми – носії

1 – термостабілізуюча рідина; 2 – відхиляючи пластини; 3 – флуоресцентні сигнали; 4 – пульсуючи краплі; 5 – висока напруга; 6 – дисплей

Не менш важливим є визначення статті ембріонів до їх пересаджування. Суттєвість його полягає в тому, що шляхом біопсії від 7...8 – денних ембріонів відбирають по 5...8 клітин, в яких електрофоретично сепарується ДНК і проводиться хромосомний аналіз на наявність «Х» або «У» хромосом. При масовому використанні (n = 622) метод дозволяє отримувати 94...95,6% вірних визначень статі ембріонів. При цьому рівень приживлення ембріонів не знижується.