Таблица 2
				Холостая проба
	Реагенты	Опытная проба
		(мл)		(мл)
	Надосадочная жидкость	0,2		0.2
	Рабочий реагент	2,0		2,0

4.Опытную пробу инкубируют в течение 15мин при 37°С.

5.Оптическую плотность в опытной пробе определяют при 520 нм против холостой пробы.

6.Концентрацию глюкозы (в моль/л) в сыворотке крови определяют по калибровочному графику.

Построение калибровочного графика осуществляется посредством введения в данную методику вместо сыворотки крови - 0,05мл стандартных растворов глюкозы с концентрациями 5,55ммоль/л и 16,0ммоль/л.

Примечание: Содержание глюкозы в сыворотке крови здоровых людей составляет 3,5 – 6,1 mМ.

*Задание III Определить содержание фруктозы в сыворотке крови с использованием резорцина по методу Селиванова

1.Для определения фруктозы к 1 мл 0,5% раствора резорцина в 1 М HCl добавляют 2 мл сыворотки крови. Смесь быстро нагревают на водяной бане до закипания.

2.При наличии фруктозы сыворотка крови быстро окрашивается в интен- сивно-красный цвет. При длительном нагревании положительную реакцию может дать и глюкоза. Поэтому оценку пробы производят в момент закипания жидкости. В 13% случаев проба положительна при пищевой нагрузке фруктами или медом.

Оформление работы

К занятию:

1. Кратко законспектировать теоретические данные по лабораторной работе.

Во время занятия:

2.Описать этапы работы.

3.Начертить калибровочные графики.

4.Оформить результаты измерений.

5.Сделать выводы.

70

Методические указания к лабораторному практикуму по курсу "Патобиохимия"

Тема:

Цель работы:

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 6

Определение содержания ЛПНП и ЛПОНП в сыворотке крови турбидиметрическим методом

Определить содержание ЛПНП и ЛПОНП в сыворотке крови турбидиметрическим методом с использованием хлорида кальция и гепарина

Оборудование и материалы:

•КФК-2

•Кюветы полистирольные

•Автоматические микропипетки

•Пробирки

•Штативы для пробирок

•Цилиндры мерные на 50-100мл

•Палочка стеклянная

Реактивы:

•Сыворотка крови

•Кальций хлористый (CaCl2), 0.025М раствор

•Гепарин, раствор с активностью 1000МЕ

•Вода дистиллированная

71

ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ ЧАСТЬ

Транспорт липидов

Жиры, попадающие в организм с пищей, и липиды, синтезируемые в печени и жировой ткани, должны транспортироваться в другие ткани и органы, где они либо используются, либо запасаются. Поскольку липиды нерастворимы в воде, возникает проблема их транспорта в водной среде (плазме крови); она решается путем взаимодействия неполярных липидов (триацилглицеролов и эфиров холестерола) с амфипатическими липидами (фосфолипидами и холестеролом) и белками, в результате образуются смешивающиеся с водой липопротеины.

Липопротеины осуществляют транспорт липидов из кишечника в составе хиломикронов, а из печени в составе липопротеинов очень низкой плотности (ЛПОНП) в различные ткани, где они окисляются (и в жировую ткань, где они запасаются). Из жировой ткани липиды мобилизуются в виде свободных жирных кислот, которые поступают в кровь и связываются с сывороточным альбумином. Нарушения липидного обмена происходят на стадиях образования или утилизации липопротеинов, в результате чего развиваются различные формы гипо- и гиперлипопротеинемии. Наиболее распространенным заболеванием является сахарный диабет, при котором недостаток инсулина вызывает избыточную мобилизацию свободных жирных кислот и снижение утилизации хиломикронов и ЛПОНП, в результате чего развивается гипертриацилглицеролемия. Большинство других форм патологии, сопровождающихся нарушениями липидного обмена, связаны главным образом с наследственными нарушениями синтеза апопротеиновой части липопротеинов, а также синтеза ключевых ферментов или рецепторов липопротеинов. Некоторые из этих наследственных дефектов являются причиной гиперхолестеролемии и раннего атеросклероза. Избыточное накопление жиров приводит к ожирению, одна из форм которого возникает из-за нарушения термогенеза в бурой жировой ткани при неправильном питании.

Помимо свободных жирных кислот выделено 4 главные группы липопротеинов, важных в физиологическом отношении и при постановке клинического диагноза: 1) хиломикроны, образующиеся в кишечнике при всасывании триацилглицерола; 2) липопротеины очень низкой плотности (ЛПОНП или пре-β-липопротеины), которые образуются в печени и используются для экспорта триацилглицерола; 3) липопротеины низкой плотности (ЛПНП или β-липопротеины), представляющие собой конечную стадию катаболизма ЛПОНП; 4) липопротеины высокой плотности (ЛПВП или α-липопротеины), участвующие в метаболизме ЛПОНП и хиломикронов, а также холестерола. Основным липидом хиломикронов и ЛПОНП является триацилглицерол, в

72