ХОД РАБОТЫ

*Задание Определить активности аспартат-аминотрансферазы и аланинаминотрансферазы в сыворотке крови человека с использованием тест-наборов, применяющихся в клинической практике

1.В соответствии с табл. 1 готовят опытную и холостую пробы для определения активности трансаминаз:

Таблица 1

	Ингредиенты	Опытная проба, мл		Холостая
			АЛТ	проба, мл
		АСТ
	Субстратный раствор (про-	0,5	0,5	0,5
	гретый при температуре 37°С)		0,1
	Сыворотка крови	0,1		−

2.Опытные пробы перемешивают стеклянной палочкой и инкубируют в течение 1 часа в суховоздушном термостате при 37°С.

3.Далее во все пробы добавляют по 0,5мл 2,4-ДНФГ (к холостой пробе - также 0,1 мл сыворотки крови).

4.Пробы перемешивают и выдерживают 10 мин при комнатной температуре.

5.Оптическую плотность в опытных пробах определяют спектрофотометрически при длине волны 540 нм против холостой пробы.

6.Для расчета активностей трансаминаз производят построение калибровочных графиков:

•для построения калибровочных графиков готовят ряд разведений субстратов (по 5 проб для АСТ и для АЛТ) в соответствии с приведенной табл. 2:

				Таблица 2
	№ пробирки	Физиологический	Стандартный раствор	Субстратный раствор для
		раствор,	пирувата натрия, мл	АСТ или АЛТ соответст-
		мл		венно, мл
	1	0,1	0,05	0,45
	2	0,1	0,10	0,40
	3	0,1	0,15	0,35
	4	0,1	0,20	0,30
	5	0,1	0,25	0,25

•Во все пробирки вносят по 0,5мл раствора 2,4-ДНФГ и далее пробы обрабатывают, как опытные (п. 4-5).

13