Вірусологія

Родини та роди вірусів, які уражують водорості, гриби, дріжджі та протозоа

221

Родини та роди вірусів, які уражують бактерії

222

ДОДАТОК 3

	Робочі середовища та розчини
Середовище Лурія-Бертані
Триптон	10г
Дріжджовий екстракт 5г
NaCl	10г
H2O	1л
Верхній агар
Триптон	10г
Дріжджовий екстракт 5г
NaCl	10г
Агар	7г
H2O	1л
Нижній агар
Триптон	10г
Дріжджовий екстракт 5г
NaCl	10г
Агар	15г
H2O	1л
Фосфатний буфер (PBS) 0,1М, рН 7,4
NaCl	8,0г
KH2PO4	0,2г
Na2HPO4 x 12H2O	2,8г
KCl	0,2г
Об”єм розчину доводять до 1л дистильованою водою
Цитратний буфер, 0,1М, рН 3,0 –6,2
Розчин А
0,1М розчин лимонної кислоти (М.м. 192,1)		19,21 г/л

(якщо використовують моногідрат лимонної кислоти (М.м 210,14),

то 21,01 г/л)

Розчин В 0,1М розчин дигідрат тринатрієвої солі (М.м. 294,12)

29,41г/л

223

Змішати розчини А та В у співвідношенні згідно таблиці та довести дистильованою водою до 100мл.

рН		3,0		3,4	3,8		4,2		4,6	5,0	5,4	5,8	6,2
Розчин	А,	46,5		40,0	35,0		31,5		25,5	20,5	16,0	11,8	7,2
мл
Розчин	В,	3,5		10,0	15,0		18,5		24,5	29,5	34,0	38,2	42,8
мл
Ацетатний буфер,0,1М , рН 3.6-5,6
Розчин А
0,1М оцтова кислота
Концентравана оцтова кислота									5,8 мл
Н2О									довести до 1000 мл
Розчин В
0,1М ацетат натрія
тригідрат ацетата нарія (М.м 136,09)									13,6 г/л

Змішати розчини А та В у співвідношенні та довести дистильованою водою до 100мл.

рН	3,6	4,0	4,4	4,8	5,0	5,2	5,6
Розчин А, мл	46,3	41,0	30,5	20,0	14,8	10,5	4,8
Розчин В, мл	3,7	9,0	19,5	30,0	35,2	39,5	45,2

Гліцин-HCl буфер, 0,1М, рН 2,2-3,6

0,1М гліцин (М.м 75) 7,5 г/л 0,1М HCl

Для приготування розчину змішати 50 мл 0,1М гліцину і згідно таблиці певну кількість 0,1М HCl в залежності від бажаної рН та довести об”єм до 100 дистильованою водою

	рН	2,2	2,4	2,6	2,8	3,0	3,2	3,4	3,6
	0,1М HCl, мл	44	32,4	24,2	16,8	11,4	8,2	6,4	5,0
Натрій-карбонат-бікарбонатний буфер, 0,05М, рН 9,6
0,015М Na2CO3			1,59г
0,035М NaHCO3			2,93г
H2O			до 1л
				224

Тріс-HCl буфер, 0,05 М, рН 8,0

Тріс – 6,057 г розчиняють в дистильованій воді і доводять рН розчину до 8,0, додаючи 5М HCl. Доводять об”єм розчину до 1 л дистильованою водою.

Сульфат амонія, насичений розчин

(NH4)2SO4	190г
Н2О	до 250мл
	Сольовий розчин Ерла
У 1000мл дистильованої H2O послідовно розчиняють:
NaCl	6,8г
KCl	0,4г
CaCl2 x 6H2O	0,39г
MgSO4 x 7H2O	0,1г
Na2HPO4 x 12H2O	0,125г
Глюкоза	1,0г

Феноловий червоний 0,4%-ний 5,0мл Стерилізують в автоклаві 15 хвилин при 1300 С, величину рН

регулюють додаванням NaHCO3 перед використанням розчину

Середовище з гідролізатом на розчині Хенкса

Середовище складається з сольового розчину Хенкса, до якого додають гідролізат лактальбуміну або казеїну.

Сольовий розчин Хенкса:

NaCl	8,0г
KCl	0,4г
CaCl2 x 6H2O	0,276г
MgSO4 x 7H2O	0,2г
КН2РО4	0,06г
Na2HPO4 x 12H2O	0,153г
Глюкоза	1,0г
Феноловий червоний	0,012г
H2O	1л

До сольового розчину додають 5г гідролізату лактальбуміну або казеїну, а потім фільтрують через потрійний складчатий фільтр і стерилізують протягом 15 хвилин в автоклаві при 115 0С.

Середовище Ігла

А) Амінокислоти, мг/л:

225

L – аргінін-HCl - 17,5 L -цистин- 12,0

L – гістидин-HCl - 8,0 L – ізолейцин 26,0 L -лейцин - 26,0

L – лізин-HCl – 29,0 L - метионін – 8,0

L - фенілаланін – 17.0 L - треонін - 24,0

L - триптафан - 4,0

L - тирозин - 18,0 L - валін - 23,0

Спочатку в 100 мл води з додаванням кількох краплин концентрованої соляної кислоти розчиняють L –цистин та L – тирозин, а потім додають інші амінокислоти

В) Вітаміни, мг/л:
біотин	1,0
холін	1,0
холін-хлориду	1,0
фолієва кислота	1,0
пантотенат кальція	1,8
пірідоксин	1,0
пірідоксаль	1,0
тіамін	1,0
нікотінамід	1,0
нікотінова кислота	1,0
рибофлавін	0,4

Біотин, фолієву кислоту і холінхлорид розчиняють в 50 мл води при додаванні 0,1мл 0,1М NaOH. В інших 50 мл води розчиняють решту речовин. Потім два розчини зливають.

С) Солі та інші речовини, г/л

NaCl	6,8
KCl	0,4
CaCl2 x 6H2O	0,1
MgSO4 x 7H2O	0,1
КН2РО4	0,4
Na2HPO4 x 12H2O	0,4
MgCl2 x 6H2O	0,05
Fe(NO3)3	0,001
Глюкоза	1,0

226

Феноловий червоний	0,005
L-глютамін	0,15

Солі розчиняють в заданій послідовності в 700мл дистильованої води.

Розчини А, В, С змішують і доводять водою до 1000мл і піддають стерильній фільтрації

227