Реакция связывания комплемента

Реакция связывания комплемента (РСК) – сложная двухэтапная серологическая реакция. В ней используют пять ингредиентов, составляющих две системы: антиген, антитело, комплемент (первая система);

эритроциты барана, сенсибилизированные (обработанные) гемолитической сывороткой, содержащей специфические к ним антитела (вторая, или индикаторная, гемсистема). При этом взаимодействие антитела с антигеном на первом этапе реакции приводит к образованию иммунного комплекса, который адсорбирует комплемент, но визуально обнаружить это невозможно. В качестве индикатора связывания комплемента на комплексе антиген–антитело на втором этапе используют гемсистему, которая, являясь иммунным комплексом, тоже способна адсорбировать его. В конечном итоге возможны два варианта результата реакции. Если антитело и антиген соответствуют друг другу и комплемент адсорбируется образовавшимся комплексом, лизиса эритроцитов гемсистемы не произойдет. При несоответствии антитела антигену, и . наоборот, комплемент, оставаясь свободным, присоединится к гемсистеме и вызовет гемолиз (рис. 31).

Как и другие серологические реакции, РСК можно использовать для выявления специфических антител по известному антигену или для определения антигена по известным антителам.

Общая характеристика ингредиентов РСК.

1. Исследуемая сыворотка перед постановкой реакции прогревается на водяной бане при температуре 56 °С в течение 30 мин для инактивации ее собственного комплемента и разводится начиная с 1:5.

2. Антигеном могут быть культуры бактерий, их лизаты, вирусы и вирус–содержащие материалы, экстракты патологически измененных органов и тканевые липиды.

3. Комплемент – сыворотка морских свинок, полученная в день опыта. В настоящее время используется производственный сухой комплемент.

4. Гемолитическая система состоит из смешанных в равных объемах гемолитической сыворотки в тройном титре и 3 % взвеси эритроцитов барана по осадку. Для сенсибилизации эритроцитов гемолизинами смесь выдерживают в термостате при температуре 37С в течение 30 мин.

Табл. 1 Схема основного опыта реакции связывания комплемента

Номер системы	Ингридиент, участвующий в реакции, мл	Номер пробирки
		1 (опытная)	2 (контроль сыворотки)	3 (контроль антигена)
Первая	Исследуемая сыворотка, разведённая 1:5	0,5	0,5	–
	Антиген в рабочей дозе	0,5	–	0,5
	Комплемент в рабочей дозе	0,5	0,5	0,5
	Раствор натрия хлорида NaCl 0,85%	–	0,5	0,5
	В термостат при температуре 37С на 1 час
Вторая	Гемолитическая система	1,0	1,0	1,0
	В термостат при температуре 37С на 1 час
	Результат	+ / –	–	–

Постановка основного опыта РСК. Реакцию ставят в общем объеме 2,5 мл, каждый из ингредиентов добавляют к рабочей дозе, содержащейся в 0,5 мл. Как видно из табл. 1, в первую пробирку вносят сыворотку, антиген и комплемент, во вторую – сыворотку, комплемент и вместо антигена изотонический раствор натрия хлорида (контроль сыворотки), в третью – антиген, комплемент и тот же раствор натрия хлорида (контроль антигена). Пробирки ставят в термостат при температуре 37С на 1 ч. Одновременно готовят гемолитическую систему, смешивая поровну гемолитическую сыворотку в тройном титре и 3% взвесь эритроцитов барана, которую и добавляют по 1 мл во все три пробирки после извлечения штатива из термостата. Смешав гемсистему с ингредиентами трех пробирок, последние вновь ставят в термостат на 1 ч, и спустя это время учитывают результаты РСК.

При учете РСК интенсивность реакции обозначается плюсами: «++++»– резко положительная реакция с полной задержкой гемолиза, жидкость в пробирке бесцветная, все эритроциты осели на дно; «+++», «++» –положительная реакция, отличается нарастанием окраски жидкости вследствие гемолиза и уменьшения количества эритроцитов в осадке; «+» – слабоположительная реакция, жидкость интенсивно окрашена, на дне пробирки незначительное количество эритроцитов. Отрицательная реакция обозначается знаком «–», при этом наблюдается полный гемолиз, жидкость в пробирке имеет интенсивно–розовую окраску («лаковая кровь»).

РСК – весьма сложная, но очень чувствительная специфическая реакция. Широко применяется в диагностике сифилиса, хронической формы гонореи, коклюша, актиномикоза, всех риккетсиозов и вирусных инфекций.