Коринебактерии дифтерии

Возбудитель дифтерии – Corynebacterium diphtheriae (греч. coryne – булава, bacterion – палочка и diphthera – пленка).

Клиника и эпидемиология. Дифтерия – острая инфекция дыхательных путей, которая характеризуется образованием в зеве и слизистой носа серовато–белых наложений (пленок), спаянных с подлежащей тканью и не снимаемых тампоном. Это крупозно–дифтерическое воспаление иногда захватывает гортань, трахею, бронхи и тогда вследствие их отека возникает затруднение дыхания и асфиксия (дифтерийный круп). Реже встречаются экстрафарингиальные формы заболевания: дифтерия глаза, уха, кожи, наружных половых органов у девочек. Дифтерия протекает при явлениях тяжелой интоксикации, исходящей из пленки, которая содержит огромное количество коринебактерий, продуцирующих очень сильный экзотоксин. Проникая в кровь, токсин поражает сердечно–сосудистую, нервную и адреналовую системы. Источником инфекции являются больной человек, реконвалесценты и здоровые носители. Передается дифтерия воздушно–капельным путем. В окружающей среде возбудитель сохраняется в течение нескольких дней и даже недель, вследствие чего заражение дифтерией возможно также пылевым путем или через инфицированные предметы, игрушки, пищевые продукты. Наиболее восприимчивы к дифтерии дети от 6 месяцев до 4 лет.

Рис. 37. Коринебактерии дифтерии

Биологические особенности возбудителя. Морфология. Коринебактерии представляют собой булавовидные полиморфные палочки длиной 1–8 мкм и шириной 0,3–0,8 мкм. Вид булавок придает им наличие на концах одного–двух зерен волютина (зерна Бабеша–Эрнста). Эти полюсные включения окрашиваются метиленовым синим или по Нейссеру (технику и способ окраски см. в главе Эубактерии). Коринебактерии дифтерии грамположительны. Благодаря «разламывающему» механизму деления их клетки в мазке располагаются под углом и образуют буквы игрек или римские пятерки. Спор и капсул не образуют, неподвижны (рис. 37). Сапрофитические двойники коринебактерии дифтерии, или коринеформные бактерии, располагаются в мазках частоколом, зерен волютина не имеют или содержат их в большом количестве.

Рис. 38. Культивары Коринебактерии дифтерии: а – gravis, б – mitis

Культивирование. Возбудитель дифтерии – факультативный анаэроб, выращивается при температуре 37°С. Для его выделения из патологического материала применяется свернутая лошадиная сыворотка (элективная среда Ру) и кровяной агар с теллуритом калия (дифференциально–диагностическая среда Клауберга). На элективной среде Ру коринебактерии дифтерии опережают в росте банальную микрофлору и через 8–14 ч вырастают в виде изолированных точечных выпуклых желтовато–кремовых колоний с гладкой или слегка зернистой поверхностью. На дифференциально–диагностической среде Клауберга растут медленно, в течение 24–48 ч, но высеваемость коринебактерии дифтерии на ней намного выше, чем на среде Ру. Самое важное достоинство среды Клауберга то, что она позволяет провести внутривидовую дифференциацию коринебактерий дифтерии на три культивара – gravis, mitis, intermedius. При этом культивар gravis (грубый) формирует радиально исчерченные, с волнистым краем шероховатые колонии серого цвета; культивар mitis (тонкий) –гладкие черные блестящие выпуклые колонии, окруженные зоной гемолиза; культивар intermedius по форме колоний близок к культивару gravis (рис. 38). На сывороточном и сахарном бульонах gravis образует зернистый осадок, иногда с пленкой, mitis и intermedius вызывают помутнение.

Коринебактерии дифтерии на простых средах не растут, а сапрофитические коринеформы вырастают. Первые, засеянные в столбик сахарного агара, являясь факультативными анаэробами, растут в его глубине вдоль укола, а сапрофиты–аэробы – на поверхности.

Ферменты. Коринебактерии дифтерии биохимически неоднородны. Для дифференциации их от сапрофитических Коринебактерии особое значение приобретает определение цистиназы и уреазы. Коринебактерии дифтерии в столбике сывороточного агара с цистином и уксуснокислым свинцом вызывают почернение среды в результате расщепления цистина до сероводорода с последующим образованием сернистого свинца (положительная проба Пизу). Уреазу палочка дифтерии не выделяет и цвета бульона с мочевиной и феноловым красным не изменяет (отрицательная проба Закса). Коринеформные бактерии могут продуцировать уреазу, но есть и такие, которые выделяют цистиназу. Коринебактерии дифтерии ферментируют глюкозу и мальтозу, а культивар gravis – также крахмал и гликоген. Коринеформы расщепляют глюкозу и сахарозу, некоторые из них гликозидазной активностью не обладают.

Токсинообразование. Среди Коринебактерии дифтерии имеются токсигенные и нетоксигенные разновидности. Коринеформы экзотоксинов не продуцируют.

Лабораторная диагностика. В диагностике дифтерии важное значение имеет микроскопический метод. Мазки из налетов зева и носа окрашивают метиленовым синим, по Нейссеру и Граму. Одновременно материал засевают на элективную и дифференциально–диагностическую среды. Выделив культуру, ее идентифицируют по культурально–биохимическим признакам. Затем определяют токсигенность, испытывая культуру на морских свинках или в реакции преципитации на пластинчатом фосфатно–пептонном агаре, подсевая ее бляшками к расположенной вдоль чашки полоске фильтровальной бумаги, смоченной антидифтерийной сывороткой.

Токсигенные штаммы Коринебактерии дифтерии при внутрикожном введении вызывают местный некроз, а при подкожном – гибель животных с экссудацией в серозные полости и резкое увеличение надпочечников. Положительная реакция преципитации в агаре проявляется образованием на границе взаимодействия антитоксина и продуцируемого экзотоксина равномерно сливающихся полос преципитации или «стрел–усиков».

Экспресс–диагностика. Если прямой микроскопией мазков, окрашенных обычными способами, выявить коринебактерии дифтерии в материале не удается, то его берут тампоном со свернутой сывороткой (метод Фольгера). Тампон помещают в термостат для подращивания культуры и через 3–5 ч им делают мазки.

Иммунитет. Иммунитет к дифтерии имеет гуморальный характер и главным образом обусловлен антитоксинами их наличие определяют реакцией непрямой гемагглютинации. Перенесшие дифтерию повторно, как правило, не болеют.

Специфическая профилактика и лечение. Для профилактики дифтерии используют адсорбированную коклюшно–дифтерийно–столбнячную вакцину (АКДС), содержащую в 1 мл 20 млрд микробных тел палочек коклюша, 30 АЕ (антигенные единицы) дифтерийного анатоксина, 10 АЕ столбнячного анатоксина. Вакцинацию начинают с 5–6–месячного возраста. Курс иммунизации состоит из трех внутримышечных инъекций по 0,5 мл препарата с интервалом 30–40 дней. Ревакцинацию проводят в 3 года, 6 и 11 лет. По эпидемическим показаниям вакцинируют все население, даже людей старше 50 лет.

Специфическое лечение проводится лошадиной антитоксической иммунной сывороткой, которую вводят дробно по методу Безредки в зависимости от тяжести заболевания в количестве от 10 000 до 250 000 АЕ Антибиотики и сульфаниламиды сокращают сроки бактериовыделения у реконвалесцентов и санируют организм здоровых бактерионосителей. Для этих целей назначают пенициллины, тетрациклины, эритромицин.