Выделение чистых культур бактерий

Чистая культура – это определенный вид микроорганизма, по наличию которого в организме больного человека и животного можно подтвердить поставленный диагноз инфекционного заболевания.

Получение чистой культуры и умение установить ее видовую принадлежность в медицинской микробиологии имеют первостепенное значение. При выполнении этой задачи следует иметь в виду, что в патологических материалах возбудитель заболевания, как правило, находится в ассоциации с банальной (посторонней) микрофлорой. Следовательно, для его изоляции гной, мокроту, осадки мочи, испражнения и прочие экскреты необходимо засеять так, чтобы получить колонии. С этой целью бактериальной петлей или шпателем материалы засевают на агаризованные среды в чашках Петри. Выросшие колонии после детального изучения пересевают на скошенные и жидкие среды для накопления биомассы. В процессе накопления исследуются культуральные свойства чистой культуры (I этап идентификации вида).

Окончательное заключение о природе чистой культуры (вида) делают только после всестороннего изучения биохимических свойств, которые тесно переплетены с культуральными; серологических реакций (действие специфических сывороток); фагочувствительности культуры и ее патогенности для экспериментальных животных (II этап идентификации). При этом следует учитывать некоторые различия в выборе метода получения чистых культур аэробных и анаэробных бактерий.

Выделение и изучение культуральных свойств бактерий–аэробов

Рис. 18. Термостат

Бактерии–аэробы выращивают в обычных условиях кислородной среды при температуре 37С в термостате (рис. 18). Схематично начальный этап исследования материала можно представить следующим образом.

Первый день исследования. Изучаемый материал микроскопируют и высевают на плотную среду в чашки Петри шпателем или бактериальной петлей (в отдельных случаях – в жидкую среду обогащения). Посевы помещают в термостат на 18–24 ч при температуре 37С.

Второй день исследования. На извлеченных из термостата чашках Петри с посевами изучают специфические признаки выросших на поверхности питательной среды колоний.

1. Вначале рассматривают их невооруженным глазом со стороны дна чашки Петри в проходящем свете. Если имеются два различных вида колоний, их нумеруют и описывают каждую в отдельности. В протоколе отмечают следующие данные: а) размеры колоний (крупная – 4–5 мм в диаметре и более, средняя –2–4 мм, мелкая – 1–2 мм, карликовая – менее 1 мм); б) форму очертаний (правильно или неправильно округлая, розеткообразная, ризоидная и др.); в) степень прозрачности (непрозрачная, полупрозрачная, прозрачная).

2. Далее колонии описывают в отраженном свете со стороны крышки, отмечая: а) цвет (бесцветная, пигментированная); б) поверхность (гладкая, блестящая, влажная или морщинистая, матовая, сухая); в) положение на питательной среде (возвышающаяся над средой, погруженная или сливающаяся с ней, плотно прилегающая к среде, уплощенная).

3. Приступают к микроскопическому изучению структуры колоний. Чашку Петри устанавливают вверх дном на предметном столике микроскопа, опускают конденсор и объективом х8 изучают: а) характер краев (ровные, волнистые, зазубренные, бахромчатые); б) структуру (гомогенная или аморфная, зернистая, волокнистая).

Из колонии готовят мазок, окрашивают по Граму и микроскопируют. Остаток колонии пересевают на скошенный агар для получения чистой культуры в достаточном количестве. Пробирки с посевами помещают в термостат на 18–24 ч при температуре 37 °С.

Техника посева колонии на скошенный агар. Чашку Петри с отмеченной колонией берут в левую руку. Бактериальную петлю держат ближе к концу петледержателя и фиксируют руку, опираясь мизинцем о борт чашки. Снимают петлей остаток отмеченной колонии, чашку Петри вкладывают в крышку и засевают скошенный агар.