Лабор.діагност.вірус.хв

супроводжується розвитком ЦПД. У моношаровій культурі ниркових клітин під агаровим покриттям вірус викликає утворення бляшок. Його можна титрувати методом бляшок.

Усі штами ВВС розмножуються в дрозофілі. Найбільш адаптовані до неї серотипи Нью-Джерсі і Бразильський.

СТІЙКІСТЬ ВІРУСУ. Вірус добре зберігається в замороженому (-20°С і нижче) і ліофілізованому станах. У 50%-ному забуференому розчині гліцерину(рН 7,5) при 4- 6°С вірусомісткі матеріали зберігають активність біля4-х міс.

ПАТОГЕННІСТЬ. Інкубаційний період продовжується
2-9, частіше 2-5 дні. Першими клінічними ознаками хвороби
є червоні плями, що з'явилися на слизистій оболонці щік, губ,
на твердому і м'якому небі					й особливо		на . язиціПотім
з'являються		одиничні	і	множинні		хворобливі		,пухирці
наповнені		прозорою	чи	жовтуватого кольору				серозною
рідиною, що, зливаючись, утворять червоні міхури. Останні
швидко	лопаються, оголюючи				яскраво-червону		поверхню,
що кровоточить. Такі ерозії іноді уражають велику поверхню
язика	і	ясен. Здебільшого			вони	протягом3-7		днів
епітелізуються. Перед утворенням пухирців чи під час появи
їх тварини пригноблені, температура тіла підвищена до41-
42°С. Після розриву пухирців знижується до нормальної. При
уражені		слизистої		оболонки		ротової		порожнини

спостерігається рясна слинотеча. Тварини видають чмокающі звуки.

Укорів часто уражаються дійки. На них з'являються везикули, що збільшуються і лопаються.

Усвиней ВС протікає гостро і характеризується лихоманкою (41-42°С) і появою везикулярного висипання на слизуватій оболонці ротової порожнини, язика, на шкірі губ, рила, міжкопитної щілини на п'ятачку, вимені. Інфекція протікає у виді ензоотії (можливо, епізоотії) з ураженням від 5 до 90% (у середньому 30%) тварин.

ЛАБОРАТОРНА ДІАГНОСТИКА. Клінічно ВС протікає, приблизно, так само, як ящур і везикулярна

екзантема свиней. Тому симптоми хвороби і патологічні зміни не можуть бути основою для діагностики цієї інфекції. Крім аналізу епізоотичної обстановки, необхідно виділяти вірус з патологічного матеріалу, узятого від хворих тварин, і проводити його ідентифікацію; ставити біологічну пробу на

морських

свинках

і

конях. Для

підтвердження

діагнозу

ставлять

РЗК

і

РН

у

культурі

тканини

чи

на

КЕ

Для

виявлення ВВС застосовують реакцію камедь-аглютинації.

ІМУНІТЕТ

І

ЗАСОБИ

СПЕЦИФІЧН

ПРОФІЛАКТИКИ. Перехворілі тварини здобувають стійкий

імунітет тільки проти визначеного серотипу вірусу на термін

від 6 до 12 мес. Для активної імунізації тварин застосовують

інактивовану вакцину. Вакцина створює імунітет тривалістю

до 3 місяців. Після ревакцинації

імунізуюча

дія

вакцини

підсилюється.

СКАЗ.

Сказ - гостропротікаюча хвороба теплокровних тварин,

що характеризується ураженням ЦНС. Вірус передається

головним

чином

зі

слиною

при

укусах

хворих

. тварин

Хвороба реєструється в різних країнах земної . Некулі

відзначено

випадків

прояву

хвороби

в

, Австралії

Великобританії, Японії. У

залежності

від

резервуарів

і

особливостей плину поширення сказу в світовому масштабі

умовно прийнято поділяти на кілька ареалів.

ВІРУС. Морфологія і хімічний склад. Установлено

генетичний плеоморфізм гена нуклеопротеїду вірусу сказу.

Усі ізоляти ВС із різних частин світу належать до серотипу 1.

Морфологічні особливості ВС представлені на Рис. 3.

КУЛЬТИВУВАННЯ. Крім інтрацеребральних пасажів

на кроликах і білих мишах ВС(шт. Fluri-HEP і Lep) успішно

репродукується

в

культурі

фібробластів .КЕУстановлена

його здатність утворювати бляшки в клітинах ВНК-21/13, під

агарозою. ВС також утворює бляшки в культуріCER, що

відрізняється високою чутливістю до ліссавірусів. Показано

високу чутливість до ВС(шт. ТС-80 і CVS) і високий рівень

нагромадження

АГ

у

заражених

перещеплювальних

культурах сагайдака (НС) і нирки ембріона африканської

кози (НЕАК). Отриманий дрібнобляшечний мутант ВС, що

відрізняється

здатністю

продукувати

дефект

неінтерферуючі частки. Передбачають, що в основі появи їх

лежить

дефіцит

білкаG.

Показана

також

можливість

культивувати ВС у культурах клітин слинної залози і нирки

собаки, жирової тканини кажана, нирок поросяти, кролика,

сірійського хом'яка,

ембріонів

вівці, людини і

японських

перепелиць. ВС адаптований і до перещеплювальних ліній

клітин (ВНК-21/13,

ендотелію

кролика,

диплоїдної

лінії

клітин легень ембріону людиниHDC S, відомої за назвою
Wi-38).	Показано			можливість			його		репродукції		в
перещеплювальних лініях клітин пойкілотермних хребетних,
зокрема, у клітинах риби, змії, черепахи і ящірки. Найбільш
перспективна перещеплювальна лінія клітин -ВНК21/13,
використання якої дозволяє накопичувати вірус у великих
кількостях. Не всі штами з однаковою легкістю піддаються
адаптації до культури клітин. При адаптації ВС до культур
клітин	вдаються			до		різних		прийомів. Інтенсивність
розмноження вірусу в культурі клітин можна постійно
контролювати методом .ІФДо							ВС	після	попередньої
адаптації сприйнятливі і КЕ. Для культивування штамів
вуличного ВС здебільшого використовують одноденні КЕ.
ГЕМАГЛЮТИНАЦІЙНІ ВЛАСТИВОСТІ. Обумовлені
наявністю у вірусу ГА ,АГщо знаходиться на										поверхні
віріону	у	виступах		його		оболонки. Було показано, що
вирощений у культурі клітин і сконцентрований ВС викликає
феномен		гемаглютинації.			Між		інфекційністю			і	ГА
активністю існує лінійна залежність, тому титрування вірусу
по інфекційності може бути замінено тестом визначення ГА
активності.
СТІЙКІСТЬ ВІРУСУ. Низькі температури консервують
вірус. Температура 23°С інактивує його через 28-53 дні, 50°С
- через 1 годину, 60°С - за 5-10 хвилин, 70°С - миттєво.
Висушування без вакууму інактивує вірус протягом10-14
днів. У	гниючому		матеріалі			він	гине	через15	днів; УФ
промені	убивають		за5-10 хвилин. Дезинфікуючі						речовини
(розчини формальдегіду, гідроксиду натрію, хлорного вапна)
діють на ВС згубно. Вірус стійкий до рН 5-10 при 4°С.
ПАТОГЕННІСТЬ. У собак інкубаційним період варіює
від декількох тижнів до року, у середньому від 2 до 8 тижнів.
Його тривалість залежить від виду, віку, резистентності
тварини, кількості вірусу, що проникнув, його вірулентності,
місця локалізації і характеру рани. Чим більше нервових
закінчень	має тканина в місці проникнення вірусу, чим
глибше рана і більше вона обслинена, тим коротше буде
інкубаційний		період. У		70%		захворілих		домашніх		тварин
клінічні ознаки сказу починають виявлятися між 15-60 днями
після зараження, а в інших раніш чи пізніше.
У	розвитку			хвороби			розрізняють			три:	стадії
продромальну, збудження і					паралічів. Продромальна					стадія

(стадія	провісників)	характеризується			підвищенням
чутливості тварин до шуму, світла, до дотиків, спотворенням
апетиту, порушенням зору, підвищенням температури тіла.
Ця стадія триває від12 годин			до 3-х	діб. Стадії збудження
властиві	приступи буйства, люті,			розладу	чутливості і
свідомості, оглумоподібний стан. Спостерігаються судороги,
парези	жувальних м'язів	і	м'язів	глотки, звуження зіниць,

прискорені позиви до сечовипускання. Лихоманка досягає максимуму. У стадію паралічів знижується і навіть зникає болюча чутливість. Порушується діяльність центрів кровообігу і дихання. Температура тіла знижується. Хвороба закінчується летально. Однак при серологічному дослідженні

диких тварин,	собак, кішок і вампірів у	сироватці крові
виявляють	ВНА, що, імовірно, було	результатом
безсимптомного перехворювання.

Плин сказу за останні роки перетерпів істотних змін і проявляється без стадій, властивих класичній хворобі. В

останні роки стали переважати паралітичне й				атипове
проявлення хвороби.
ДІАГНОСТИКА.	Діагноз	ставлять	на	підставі
епізоотологічних	даних,	симптомів		хвороби,
патологоанатомічних змін (вони мають менше значення) і,
головним чином, результатів		лабораторних	досліджень.

Лабораторна діагностика полягає в дослідженні головного мозку тварин з метою виявлення вірусного АГ у РІФ, РДП, виявленні тілець Бабеша - Негрі і біопроби на білих мишах.

У багатьох країнах світу в тому числі і в Російській Федерації в даний час організовано виробництво наборів для діагностики сказу в РІФ і РДП у ВНДТІБП і КазНДВІ.

Виділення вірусу. У лабораторію для дослідження направляють свіжі трупи дрібних тварин, від великих тварин - голову чи головний мозок. У деяких випадках допускається консервування головного мозку в50%-ному гліцерині. Труп чи голова повинні бути ретельно упаковані в поліетиленовий

мішок, мозок - у банку з притертою скляною чи гумовою

пробкою, залитої		парафіном.		Матеріал		упаковується		у
вологонепроникну		тару.	Для	вірусологічних досліджень
придатний	тільки	не	консервований			.мозокНеобхідно
пам'ятати, що розтин трупа, витяг мозку й інші операції з
патологічним	матеріалом			варто	проводити		в	умовах
стерильності	і	строгого		дотримання		заходів		особистої

профілактики: міцно фіксують голову тварини, захищають руки двома парами рукавичок(хірургічні й анатомічні), для захисту очей надягають окуляри, а на ніс і рот6-шарову марлеву пов'язку.

Лабораторні дослідження матеріалу на сказ проводять поза всякою чергою; результати негайно повідомляють лікарю господарства і головному лікарю району (міста).

Індикація й ідентифікація вірусу. Порядок проведення досліджень: із кожного відділу головного мозку лівої і правої сторін (амонового рогу, мозочка, кори півкуль і довгастого)

готують по 4 мазка-відбитки для РІФ і виявлення тілець Бабеша-Hегрі; з мозковою тканиною ставлять РДП; при негативних результатах ставлять біопробу.

Виявлення специфічних тільцьвключень. Мазкивідбитки фарбують по Селлерсу, Муромцеву чи іншими методами. Після фарбування препарати переглядають у світловому мікроскопі з імерсійною системою. Позитивним результатом вважають наявність специфічних тілець Бабеша

-Негрі (при фарбуванні по Селлерсучітко обкреслені овальні чи довгасті гранулярні утворення рожево-червоного кольору в протоплазмі, при фарбуванні по Муромцеву- світло-фіолетові з темно-синіми включеннями тельця Бабеша

-Негрі, частіше вони розташовані поза нервовими клітинами.

Найбільш	характерна		особливість		тілець	Бабеша-
Негрі - їхня внутрішня структура, що дозволяє абсолютно
точно диференціювати їх. Усередині видні маленькі зернятка
- базофільні зернистості темно-блакитного, навіть чорного
кольору величиною 0,2-0,5 мкм..
РІФ. Один з основних тестів при діагностиці сказу. При
висококваліфікованому		виконанні		одержують 99у -100%
збіги з методом біопроби. Звичайно в діагностичній практиці
використовують	прямий		метод	, РІФщо	проводять		із
застосуванням	антирабічного			флюоресциюючогоIg.
Фіксацію препаратів		в	охолодженому(8-10°С)			ацетоні

проводять не менше4-х годин. Як негативний контроль
використовують мазки-відбитки головного мозку здорових
білих	мишей. Враховують	результати	візуально	в
люмінесцентному мікроскопі на основі оцінки інтенсивності
світіння комплексу АГ-АТ. АГ ВС виявляється у вигляді
яскравих жовто-зелених чи зелених гранул різної форми і
величини	в клітинах(частіше	поза клітинами). Діагноз

вважають установленим, якщо в декількох полях зору виявляють достатню кількість (не менш 10) типових гранул з яскравим зеленим світінням чи безліч дрібних крапок. У контролі подібного світіння не повинно бути.

РДП. Застосовують для виявлення АГ ВС у не

консервованому головному мозку тварин, що загинули від
вуличного	сказу, чи мишенят,			що	використовували			у
біопробі.	РДП	ставлять	мікрометодом			на	предметних
скельцях,	використовуючи 1-1,5%-ний				агаровий		гель	за
загальноприйнятою методикою
РДП проста по виконанню і специфічна, але відсоток
виявлення вірусного АГ у досліджуваному матеріалі складає
45-70. При дослідженні головного мозку мишей, отриманого
при позитивній біопробі, РДП виявляє до100% випадків.
Відсутність у		досліджуваному		матеріалі		тілець	Бабеша-

Негрі, специфічної флюоресценції і негативна РДП не дають
підстави виключити наявність вірусу. У цьому випадку
остаточний діагноз ставлять за результатами						біопроби		на
білих мишах з наступною ідентифікацією вірусу.
Біопроба. Прийнято			вважати,	що	біопроба є		більш
ефективним методом, чим виявлення тілець БабешаНегрі,
РІФ та інші. Однак і вона в окремих випадках виявляється
негативною, незважаючи на підтвердження діагнозу сказ
шляхом	виявлення		тілець-включень		і .	ВідсотокРІФ
негативних результатів по біопробі коливався від 1,3 до 12.
РЗК.	Виявлення		специфічного		АГ	у	РЗК	при
діагностиці сказу застосовується рідше, ніж інші методи.
ІМУНІТЕТ		І	ЗАСОБИ			СПЕЦИФІЧНОЇ
ПРОФІЛАКТИКИ. В			даний	час		для	специфічної
профілактики		сказу	застосовують		інактивовані		і	живі
вакцини. У медицині використовуються тільки інактивовані,

слабко алергенні і безалергійні вакцини. Вони, в основному, розрізняються по способі розмноження вірусу, концентрації і ступеню очищення вірусного . АГУ якості ад’юванту

використовують	солі	алюмінію. Антирабічні	вакцини,
отримані з	нервової	тканини, уступають у	відношенні

чистоти, активності і безпеці препаратам, приготовленим на клітинних культурах.

Література:

1.Калиніна О.С., Панікар І.І.. Скибіцький В.Г.

Ветеринарна вірусологія. К., 1994. «Вища освіта», 431 с. 2.Панікар .І І., Скибіцький В. Г., Калініна О. С.

Практикум з ветеринарної вірусології. – Суми: Козацький вал, 1997. – 236 с.

3Скибіцький В.Г., Ташута С.Г. Ветеринарна вірусологія. Посібник (КД), 2003.

4..Скибіцький В.Г., Панікар І.І., Ткаченко О.А. і ін . Практикум

зветеринарної вірусології . К., «Вища освіта». 2005. – 208

5.В.В.Недосеков

6..–.В.Н. Сюрин, Р.В. Белоусова, Н. В. Фомина. Диагностика вирусных болезней животных: Справочник. – Москва.: Агропромиздат, 1991. – 528 с.

7.В.Н. Сюрин, А.Я. Самуйленко, Б.В. Соловьёв, Н. В. Фомина. Вирусные болезни животных. – Москва, ВНИТИБП, 928 с, ил.

8.Badrane И., Borloul С, Perrin P. Tordo N. Evidence of two lyssavirus phylogroups with distinct pa-thogenecity and immunogenicity // J. Virol. — 2001. — Vol. 75 — P. 3268-3276.

9.Bourhy H., Cowley J. A., Larrous F. et al. Phylogenetic relationships among rhabdoviruses inferred using the L polymerase gene // J. Gen. Virol. — 2005. — Vol. 86. — P. 2849-2858.

10.Hooper D. G. The role of immune responses in the pathogenesis of rabies // J. Neurovirol. — 2005. — Vol. 11-P. 88-92.

11.Kuzmin I. V., Hughes G. J., Rupprecht С. Е.

Phylogenetic relationships of seven previously unclassified viruses within the famDy Rhabdoviridae using partial nucleoprotein gene sequences // J. Gen. Virol. - 2006. - Vol. 87 - P. 232-231.

1.Shape R. E. Rabies related virases // Yale J. Biol. Med. - 1982. - Vol. 55 - P. 271-275.

12.Tordo N., BenmansoorA., Calisher C. et al. Rhabdoviridae. In: Virus Taxonomy. Eight Report of the International Committee on Taxonomy of Viruses / С M. Fauquet, M. A. Mayo, J. Maniloff, U. Desselberger, L. A. Ball (eds.). — Elsevier Academic Press, 2005. — P. 623— 644.

13.Wagner R., Rose S. Rhabdoviridae: the viruses and

their replication. In: Virology / B. N. Fields, D. M. Knipe, P. M. Howley (eds.). - N.Y.: Lippincott-Raven Publ, 1996. - P. 1121-1159.

14.WHO Expert Consultation on Rabies: first report // WHO technical report series. — 2004. — No. 931. 15.Wolker P. S. Bovine ephemeral fever in Australia and the world // Curr. Top. Microbiol. Immunol. - 2005. - Vol. 292. - P. 57-80.

16.Fu Z. F. Genetic comparisons of rhabdoviruses from animals and plants // Curr. Top. Microbiol. Immunol. - 2005. - Vol. 292. - P. 1-24.

2.

Питання для самоконтролю:

-Морфологія та репродукція рабдовірусів.

-.Діагностика сказу.

-Діагностика везикулярного стоматиту..

ЛЕКЦІЯ 14.

Тема лекції: ЗАХВОРЮВАННЯ ТВАРИН, ОБУМОВЛЕНІ ПІКОРНАВІРУСАМИ.

АНОТАЦІЯ. Викладено біологічну характеристику пікорнавірусів та актуальних хвороб тварин, що ними обумовлені Проаналізовано сучасні методи лабораторної діагностики пікорнавірусних інфекцій.

План

1.Біологія пікорнавірусів.

2.Ящур.

3.Ентеровірусний енцефаломієліт свиней

4.Вірусний гепатиту каченят.

ЗМІСТ ЛЕКЦІЇ

Родина пікорнавірусів ( Picornaviridae) включає найдрібніші за розміром РНК вмістимі віруси(Pico - дрібний, RNA - РНК). Більше десяти пікорнавірусів є збудниками небезпечних хвороб для людини(збудник полімієліту, гепатиту )А та тварин (збудник ящуру, ентеровірусного енцефаломієліту свиней та ін.).

Родина пікорнавірусів включає чотири : родиg. Enterovirus,

g. Cardiovirus, g. Rhinovirus, g. Aphtovirus.

Ентеровіруси включають полівіруси людини і мишей віруси Коксакі, ЕСНО-віруси, ентеровіруси людей, мавп, свиней, великої рогатої худоби, віруси комах.

До кардіовірусів відносяться вірус енцефаломіокардиту (ЕМС), енцефаломієліту (ЕМ) мишей і віруси Менго.

Риновіруси включають понад100 серотипів вірусів людини, риновіруси великої рогатої худоби (2 серотипи).

Афтовіруси представлені сімома типами вірусу ящуру

(А, О, С, САТ І-3, Азія-1).
Морфологія, хімічний склад
Віріони			пікорнавірусів			сферичної			форми	діаметром
22-30 нм.
Геном являє				собою	однонитчасту				інфекційну		РНК,
зв'язану S1-кінці з білком VPg. Крім останнього вірус містить
ще чотири структурних білка (VP1, VP2, VP3, VP4). Всі вони є
капсидними		білками.		Перші		три		утворюють		зовнішню
поверхню капсида, а останній (VP4) знаходиться в середині
капсида, асоціюючись з геномною РНК.
Вважається, що основним							протективним антигеном
є білок VP1, у той же час нейтралізуючи епітопи виявлені
також і у білків VP2 та VP3.							-	висококонтагіозне			з
Ящур	-	Aphtae		epizooticae
гострим		перебігом				захворювання				парнокопитних.
Характеризується			лихоманкою,			везикулярним (афтозним)
ураженням слизових оболонок і шкіри.
Збудник. Foot-and- Mouth Disease virus
був	відкритий			у1898	р. німецькими				дослідниками
Лефлером та Фрошом.
Структура та хімічний склад.
Віріони		вірусу		ящуру	ізометричної				форми, розміром

20-25 нм. Молекулярна маса сформованих віріонів становить

7х106Д, константа

седиментації - 140 S, пливуча

щільність

1,43 г/см3.

РНК вірусу інфекційна, молекулярна маса її становить

2,2-3,1х106Д. Інфекційність РНК зберігається в межах3,0-

11,5 рН, тоді як цільні віріони втрачають інфекційність при

рН нижче 6,5.

Цікаво, що

при низьких температурах

вірус

краще

зберігається

від

РНК

ізольованої, навпакиі , -

ізольована РНК більш стабільна при високих температурах.

Вірус ящуру містить4 основних структурних

білка:

VP1, VP2, VP3, VP4

з молекулярною масою34000, 30000,

26000 та 14000 Д відповідно.

Білки VP1, VP2 та VP3

є капсидними.

Стійкість до фізико-хімічних факторів

Вірус надзвичайно стійкий. Він

не

інактивується

ефіром, хлороформом, 1%-ним розчином фенолу, 75%-ним

розчином

етилового

спирту. Розчини

лугів (2%)

вбивають

його

за 10

хв.

В

літературі (Афзал, 1972) описані

терморезистентні штами вірусу ящуру. Так на території

Пакистану виділений терморезистентний ізолят, який не

інактивується протягом 30 хв. при нагріванні до 800С.

Антигенна структура

На

поверхні

віріону

виявлено

чотири

антигенні

ділянки,

три

з

яких

індукують

утворення-

вірус

нейтралізуючих антитіл. Головний антигенний сайт вірусу

ящуру

відповідає 141-160 амінокислотним

залишкам

білка

VP1 і має вигляд петлі g-Р, що виступає на поверхні віріону.

антигенна

Для

вірусу

ящуру

характерно

є

варіабельність. Нині відомо 7

серологічних типів

вірусу: А,

О, С, Sat-1, Sat-2, Sat-3 та Азія 1. Кожний з названих типів а

антигенному

відношенні

також

гетероморфні. Всередині

типів розрізняють варіанти чи підтипи. Так тип А має32

варіанти (А-4 –А-32), О-11, С-5, Sat-1 - 7, Sat-2 - 3, Sat- 3 - 4,

Азія 1 - 2.

Доведено, що основною причиною утворення повних

антигенних варіантів вірусу ящуру є зміна амінокислотної

послідовності (антигенний дрейф) у VP1

Репродукція і кільтивування .

Проникає

у

чутливу

клітину

шляхом віропексису.

Після

депротеїнізації, вірусна

РНК

транслюється

з

утворенням великого поліпептидного ланцюга, який потім

нарізається на

відповідні

вірусні

білки. Синтез

вірусних