3.Основные сведения о кинетике ферментативных реакций. Факторы влияющие на скорость р-ий.

Кинетика – раздел энзимологии, кот занимается изучением различных факторов на активность Ф.

1 ФАКТОР. Влияние концентр S на скорость р-ии.

V = Vmax[S] / Km + [S] – уравнение Михаэлиса-Ментена-з.действ.масс

Km – константа Михаэлиса – величина, численно равная конц.S, при кот скорость реакции равна половине скорости мах, она показывает на сколько велико сродство между Ф и S. Чем бол Km, тем меньше сродство. Km=10^-2-10^-5моль

А)если S >> Km, то V = Vmax

Б)если S << Km, то V = Vmax[S]/Km, т.е. в данном случае скорость реакции прямо пропорциональна

В)если равны, то скорость равна половине скорости мах.

Для точного определения Vmax и Km было предложено уравнение Лайнуивера- Берка:

1/V= (Km/Vmax ^* 1/S) + 1/ Vmax

2 ФАКТОР. Зависимость от концентрации Ф. Чем больше конц.Ф, тем выше скорость – прямопропорциональная зависимость

3ФАКТОР. Влияние температуры на скорость хим.р-ии

С

К

О

Р

30 –опримум, 40,50, 60- денатурация

4 ФАКТОР. Зависимость от рН Ф.

5 ФАКТОР. Влияние ингибиторов. Ингибирование: обратимое (если после удаления ингибитра Ф восст.) и необратимое.

Виды необратимого: -специфическое (действие цианидов на цитохромоксидазу), -неспецифическое(ведет к денатурации Ф, соли тяж.Ме, радиация,УФ)

Виды обратимого: -конкурентное –ингибитор по своей структуре похож на S, поэтому может взаимодействовать с акт.центром Ф, но при повышении концен.S, происходит вытеснение ингибитора из акт.центра, и скорость восстанавливается(сульфаниловые лекарства).

-неконкурентное – ингибитор не похож на субстрат, поэтому взаимодействует не с акт.центром, а с др.участком или с акт.центром, но не прочно.

Vmax без ингиб >> Vmax с ингибитором

4. Содержание глюкозы в крови. Возрастные особенности.

Норма взрослого человека – 3,5-5,5 ммоль/л, если больше 11 ммоль/л, то сахар появляется в моче. Если меньше 3,3 ммоль/л – гипогликемия, больше 6 ммоль/л – гипергликемия. Недоношенные - 1,1-3,33, новорожденные - 2,22-3,33, 1 месяц – 2,7-4,44, 7 лет – 3,33-5,55, до 60 лет – 4,44-6,38, старше 60 – 4,61-6,10.

Билет №5

1.Гидролиз белков. Методы, условия, продукты гидролиза. Определение степени гидролиза. Использование гидролизатов в медицине.

Гидролиз – расщепление пептидной связи при участии молекулы воды (вода отдает функциональные группы Н и ОН для восстановления пептидной связи).

Различают ферментативный, химический, полный и неполный гидролиз. Гидролиз протекает постепенно: белок – полипептид – олигопептид – дипептид – АМК. Его можно остановить на любой стадии, изменив оно из условий гиролиза.

Ферментативный гидролиз in vivo –пищеварение, для проведения его in vitro осн.усл являются: 1)набор очищенных кристаллических Ф, потому что Ф высоко специфичны; 2) t=37; 3)небольшое кол-во Ф по отношению к Б; 4) процесс длительный (неск.суток). Недостатки: зарастание микрофлорой и выделение токсических продуктов.

Химический гидролиз. Условия: 1)концентрированные щелочи и к-ты (25-30% 5-12н); 2) объем к-т, щелочи в 5-10 раз больше объема Б; 3) Время гиролиза от 10 до 96 ч; 4) t=100-110. Недостатки: при щел.гидролизе происходит рацетизация АМК, т.е. они переходят из L-ряда в D-ряд и живыми ор-мами не усваиваются; при кисл.гидролизе разрушается ряд АМК (триптофан, цистеин).

Оценка глубины гидролиза: 1.Качественные методы. Биуретовая р-ия (на пептидные связи), осадочные р-ии с ТХУ, НNO₃, сульфосалициловой кислотой; р-ия с нингидрином (положение свободных NH₂).

2. Количественные. Основаны на р-ии АМК с формальдегидом, на определении аминного азота – это азот, вход.в аминогруппы, наход.в α-положении.

В негидролизированном белке отношение аминного азота к общему составляет 1-10%, в неполном гидролизате – 10-75%, в полном – 70-90%.

Использование гиролизатов в меицине: 1)для изучения первичной структуры Б; 2)для парентерального питания; 3)в качестве кровезаменителя.