5. Литература

1. Калетина Н.И. Токсикологическая химия. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2008.

2. Плетенева Т.В. Токсикологическая химия. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2006.

3. Байзолданов Т. Токсикологическая химия ядовитых веществ, изолиремых методом экстракции. – Алматы,2002.

4. Крамаренко В.Ф. Токсикологическая химия. – Киев: Высшая школа, 1989.

5. Швайкова М.Д. Токсикологическая химия. – М.: Медицина,1975.

6. Контрольные вопросы (обратная связь)

1. Что такое экстракция? Перечислите основные стадии процесса экстракции из биологического материала.

2. Назовите общие методы изолирования лекарственных веществ из биологического объекта.

3. От чего зависит степень извлечения?

4. Назовите частные методы изолирования лекарственных веществ из биологического объекта.

5. В чем заключается сущность метода изолирования подкисленным спиртом (метод Стаса-Отто)?

6. Сущность метода изолирования подкисленной водой (метод А.А.Васильевой)?

7. Для чего получают кислое и щелочное хлороформное извлечение?

8. Перечислите способы очистки вытяжек из биологического материала.

1. Тема 2 – Методы о6наружения и определения лекарственных веществ при проведении судебно-химической экспертизы. Барбитураты в ХТА.

2. Цель: Ознакомить студентов с методами обнаружения и количественного определения барбитуратов при проведении СХА, чтобы студент знал и мог применить их в своей практической деятельности.

3. Тезисы лекции

Направленный химико-токсикологический анализ

производных барбитуровой кислоты

Объекты исследования: печень, почки, мозг, селезенка, содержимое желудка, кровь, моча.

Изолирование. При направленном исследовании на барбитураты используются частные методы изолирования – водой, подщелоченной гидроксидом натрия (метод П. Валова) и водой, подкисленной серной кислотой (метод В.И. Поповой).

ТСХ скрининг. При проведении анализа в общей системе растворителей ацетон-хлороформ (1:9) барбитураты находятся во второй зоне со значениями R_f 0,31-0,41. В качестве проявителя барбитуратов используют 5 % раствор сульфата ртути и 0,1 % раствор дифенилкарбазона в хлороформе. При наличии барбитуратов появляются пятна, окрашенные в сине-фиолетовый или красно-фиолетовый цвета. Затем барбитураты элюируют из слоя сорбента ацетоном и элюаты исследуют в частной системе хлороформ-н-бутанол-25% раствор аммиака (70:40:5), сорбент - силикагель КСК, забуференный 0,1 н. раствором борной кислоты. Идентификация индивидуальных барбитуратов проводится в присутствии «свидетелей».

Обнаружение. После очистки кислой хлороформной вытяжки экстракционным методом, возгонкой, хроматографическими методами проводят подтверждение наличия барбитуратов химическими и физико-химическими методами.

Реакции окрашивания: а) с аммиачным раствором нитрата или ацетата кобальта. Наблюдается фиолетовое окрашивание, обусловленное образованием внутрикомплексного соединения:

Реакция не специфична, т.к. её дают пурины, пиримидины, сульфаниламидные препараты. Выполнению этой реакции мешают вода, которая разлагает окрашенные соединения. Реакция является высокочувствительной и носит предварительный характер.

б) мурексидная проба – при наличии барбитуратов наблюдается розовое окрашивание. Реакция обладает низкой чувствительностью и неспецифична, т.к. её дают пурины, пиримидины.

Микрокристаллоскопические реакции: а) выделение кислотной формы барбитуратов – для барбитала характерны бесцветные прозрачные прямоугольные призмы; для фенобарбитала – сфероиды; для барбамила – пластины или призмы, сгруппированные в виде сфероидов; для этамина натрия – призматические кристаллы. Реакции чувствительные и специфичные. Однако необходимо учитывать возможность появления полимофных модификаций, поэтому для подтверждения наличия индивидуальных барбитуратов проводятся б) частные реакции с реактивами:

- с хлорцинкйодом (барбамил, барбитал, этаминал натрия образуют темно-красные прямоугольные пластинки);

- с железйодидным комплексом (барбамил, фенобарбитал, этаминал натрия – оранжево-коричневые или коричневые призмы и их сростки);

- с меднойодидным комплексом (барбами, этаминал натрия – призмы и их сростки);

- со спиртовым раствором йодида калия (барбитал, этаминал натрия – призмы и их сростки);

- с меднопиридиновым реактивом (барбитал – фиолетовые кристаллы в форме звездочек, друз и прямоугольников). Наличие осадка обусловлено образованием внутрикомплексного соединения:

Физико-химические методы идентификации: обнаружение по УФ- и ИК-спектрам; методы ТСХ, ГЖХ, ВЭЖХ.

Количественное определение проводится:

- спектральными (УФ-спектрофотометрия, фотоколориметрия, дифференциальная спектрофотометрия, экстракционная фотометрия);

- хроматографическими (ТСХ, ГЖХ, ВЭЖХ).

Наиболее перспективным среди перечисленных является дифференциальная спектрофотометрия основанная на имино-имидольной таутомерии барбитуратов. После измерения оптической плотности при различных значениях рН возможно нивелировать влияние примесей на полученные результаты:

C = ∆D / E^1%_1cm · 1,

где: С – концентрация барбитурата в %,

∆D разность оптических плотностей, измеренных:

- при рН 2 (примеси) и рН 10 (барбитураты в имидольной форме и примеси);

- при рН 10 и рН 13 (барбитураты в диимидольной форме),

E^1%_1cm - удельный показатель поглощения,

1 – толщина поглощающего слоя, в см.

В сочетании с предварительной хроматографической очисткой (методом ТСХ) дифференциальная спектрофотометрия обеспечивает надежные и воспроизводимые результаты количественного анализа барбитуратов.