Тема 2 – Принцип химического метода анализа карбоксигемоглобина.

Цель: Ознакомление студентов с химическими метода анализа карбоксигемоглобина.

Задачи обучения: сформировать у студентов знания по методам химического анализа карбоксигемоглобина.

Форма проведения: групповое обсуждение с презентацией, обсуждение результатов проведения индивидуальных занятий

Задания по теме – презентация химических методов анализа карбоксигемоглобина

1. Методы определения оксида углерода (II) в биообъектах.

2. Определение СО в крови

Раздаточный материал

Методы определения оксида углерода (II) в биообъектах

Определение СО в крови

Для определения СО в крови можно использовать различные методы, включая предвари­тельные пробы, спектрофотометрию, газовую хроматографию и специальные методы. Опреде­ление СО в крови проводят либо по СО, либо выделяют из пробы крови газобразную смесь СО, СО,. О,, N.. измеряют количество газа и тем или иным способом устанавливают содержа­ние в нем оксида углерода (II).

Предварительные методы исследования (химические). При выполнении нижеуказанных реак­ций параллельно исследуют два образца — кровь, не содержащую НЬСО и кровь пострадавшего при отравлении. В образцы добавляют одинаковые объемы реактивов и наблюдают за измене­нием окраски. Изменение окраски происходит только в образцах с нормальной кровью. Окраска образцов крови пострадавшего при отравлении не изменяется или изменяется незначительно.

Экспресс-тесты, или пробы, проводят непосредственно на месте происшествия или сразу после поступления пострадавшего в клинику. Цель — быстро установить наличие НЬСО.

Тест /. К 15 мл воды добавляют 1—2 капли исследуемой крови и отдельно донорскую кровь, пробирки встряхивают. В норме проба светло-розового цвета, при наличии НЬСО — вишне­во-красного. Затем добавляют 5 капель 20% раствора гидроксида натрия. После энергичного встряхивания при наличии НЬСО в течение нескольких секунд сохраняется светло-розовый цвет (концентрация НЬСО не менее 20%). Если светло-розовый цвет перейдет в соломенно-желтый, в крови нет НЬСО или его содержится менее 20%. Проводят контрольную пробу с донорской кровью.

Тест 2. В две пробирки вносят по 10 мл дистиллированной воды, затем в первую — 5 капель анализируемой пробы (кровь) и 5 капель свежеприготовленного раствора сульфида аммония, во вторую — 5 капель донорской крови и 5 капель свежеприготовленного раствора сульфида аммония. После осторожного перемешивания добавляют в обе пробирки по 2—3 капли 30% раствора уксусной кислоты. Анализируемая проба при наличии НЬСО окрашивается в крас­ный цвет, контрольная проба (донорская) — в грязно-зеленый.

Тест 3. К 5 мл крови (анализируемой пробы и донорской), разбавленной в 100 раз дистил­лированной водой, добавляют 5 капель концентрированного раствора сульфида меди. Дли­тельно и энергично встряхивают. Кровь, содержащая НЬСО. красного цвета, не содержащая — зеленого.

Тест 4. К 1 капле крови (анализируемой пробы и донорской) добавляют 40 капель воды и 5 капель 40% раствора фенилгидразина. Кровь, содержащая НЬСО. светло-красная, не содер­жащая НЬСО — темно- или черно-красная.

Тест 5. К 5 мл крови (анализируемой пробы и донорской), разведенной 100 раз добавляют 5 капель 1% раствора гексаиианоферрата (III) калия. Кровь, содержащая НЬСО, вишневого цвета, не содержащая — светло-коричневого (железо гемоглобина окисляется до Ре").

Другие химические пробы. Исследуемую кровь и контрольную кровь из печени животного в количестве 2—5 мл разбавляют 100 мл воды. При этом кровь, содержащая НЬСО. имеет ярко-красный цвет, контрольная кровь — буроватый оттенок.

Затем проводят следующие химические реакции.

• К разбавленным в соотношении 1:100 пробам испытуемой и контрольной крови прибав­ляют равные объемы 30% раствора гидроксида натрия. Кровь, содержащая оксид углерода, сохраняет розовую окраску, контрольная принимает зеленовато-черную окраску.

• К разбавленным в соотношении 1:4 пробам испытуемой и контрольной крови прибавляют приблизительно по 3 объема 1% раствора танина и взбалтывают. Кровь, содержащая оксид углерода, сохраняет розовый цвет; контрольная принимает серую окраску.

• К разбавленным в соотношении 1:20 пробам испытуемой и контрольной крови прибавляют равные объемы 20% раствора гексанианоферрата (III) калия и 2 мл разведенной 1:2 уксус­ной кислоты. Кровь, содержащая оксид углерода, сохраняет розовый цвет, контрольная приобретает бурую окраску.

• Контрольная кровь, смешанная с 5 частями раствора основного ацетата свинца, принимает грязно-зеленую окраску, кровь, содержащая оксид углерода, сохраняет свой цвет.

• Контрольная кровь после разбавления формалином спустя короткое время принимает гряз­но-бурую окраску, кровь, содержащая оксид углерода, сохраняет красный цвет в течение нескольких недель.

Реакции можно проводить, смочив разведенной кровью белую фильтровальную бумагу, на­нося затем на нее реактивы. Описанные реакции малопригодны для обнаружения малых ко­личеств НbСО в крови.

Литература

1. Токсикологическая химия: метаболизм и анализ токсикантов: учебное пособие + СD/ под ред. Н.И. Калетиной. – М., 2008. – 1016 с. Переплет.

2. Токсикологическая химия: учебник / под ред. Т.В. Плетеневой. – 2-ое изд. – М., 2008. – 512 с. Переплет.

3. Лужников Е.А. Клиническая токсикология. -М.,"Медицина", 1994. –189с.

Контрольные вопросы

1. Качественный анализ СО в крови.

2. Химические экспресс-методы обнаружения в крови карбоксигемоглобина.

3. Спектроскопический метод исследования карбоксигемоглобина в крови.

4. Принцип метода. Методика исследования.

5. Метод газожидкостной хроматографии в анализе оксида углерода.

6. Оценка результатов количественного определения химико-токсикологического анализа.

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ ПОД РУКОВОДСТВОМ ПРЕПОДАВАТЕЛЯ