3. Тезисы лекции

В химико-токсикологическом анализе наркотических и токсикологических веществ вызывающих токсикоманию основными биологическими объектами являются биожидкости: моча, кровь, (плазма, сыворотка), слюна, а также смывы. В крови определяют алкоголь, барбитураты, производные 1,4 – бензодиазепина, метаквалон, мепробамат, а в моче - фенотвазин, трициклические антидепрессанты, алкалоиды опия, амфетамины и другие соединения, в смывы – компоненты гашиша.

В любом виде анализа возможными источниками ошибок являются:

1) пробоотбор; 2) методы хранения; 3) приготовление образца; 4) техника эксперимента; 5) предубеждения химика токсиколога.

Правила и меры предосторожности пробоотбора. Результаты анализа зависят от многих факторов, в том числе, правильного отбора, пробы. Для каждого обследуемого необходимо указывать: возраст, пол, использование каких-либо лекарств, алкоголя, кофе, чая, курения. Эти факторы могут влиять не только на характер фоновых соединений, но и на скорость метаболизма анализируемых веществ, и в конечном счете и на концентрацию в биологических жидкостях организма.

Моча отбирается в чистый сухой флакон в количестве не менее 200 мл. Только при исследовании на наличие алкоголя достаточно 8-10 мл мочи. Флакон тотчас закрывают пробкой, которую фиксируют лейкопластырем или алюминиевым колпачком.

Важным фактором мочи, как объекта анализа является величина рН. При величинах рН ниже 6-7, с мочой более эффективно выводятся вещества основного характера, а при рН выше данного предела - вещества кислотного характера. Во время хранения рН мочи увеличивается из-за действия бактериальной флоры, выделяющей аммиак, что является нежелательным.

Рекомендуется хранить образцы мочи при пониженных температурах (при анализе очень быстро разлагающихся веществ - в замороженном виде) с добавлением антисептиков, таких как борная кислота, растворы фторида натрия и др. Однако, при этом следует учитывать их вклад в образующийся аналитический фон.

Из потенциальных эндогенных соединений необходимо учитывать присутствие низкомолекулярных продуктов метаболизма белков, аминокислот и сахаров (амина, мочевина, соли карбоновой кислоты и др.), небольших количеств пептидов и сахаров, стероидов, пигмента уробилина и др.

Кровь (плазма, сыворотка). У вновь поступивших больных кровь в случае необходимости отбирается на химико-токсикологическое исследование одновременно с мочой. Общепринятым является отбор 15-20 мл крови.

Кровь отбирается из поверхностной вены через иглу самотеком в сухой пенициллиновый флакон, содержащий гепарин (3-5 капель на каждые 10 мл крови). Флакон закрывается стандартной резиновой пробкой, которую фиксируют лейкопластырей или алюминиевым колпачком. Содержимое флакона тотчас перемешивают. На флаконы наклеивают этикетки с указанием фамилии, имени, отчества больного, даты, времени, способа и места отбора крови.

Категорически запрещается использовать другие консерванты и стабилизаторы крови, также производить отбор крови шприцем.

Категорически запрещается обрабатывать кожные покровы в местах укола эфиром, спиртом или спиртовыми растворами. Место укола следует обрабатывать водными растворами этакридина (риванола) или фурацилина.

Если для предотвращения свертывания крови используются антикоагулянты, необходимо иметь в виду, что гепарин вытесняет мирные кислоты из мест связывания с альбумином, а ЭДТА и NaF вызывают осмотическую дегидратацию эритроцитов и разбавляют плазму, что в конечном счете будет влиять на количественное определение.

Для замедления энзиматической активности, кровь рекомендуется хранить в холодильнике в замороженной виде.

Эндогенные соединения крови: жирные кислоты, стероидные гормоны, холестерин и др.

На флакон с отобранной пробой должна быть наклеена этикетка с указанием фамилия, имени, отчества пациента, даты и времени отбора пробы.

Примечание. Только для диагностики алкогольного опьянения, возможно, отбирать I мл крови их мякоти пальца в стерильную пипетку, предварительно промытую раствором гепарина в разведении 1:10. Однако, при этом надо помнить, что в этом случае проба не является однородной, так как получается смесь венозной, артериальной а лимфатической крови. Химик-токсиколог должен помнить, что содержание токсического вещества в артериальной или венозной крови может быть различным. На наркотические вещества предпочтительнее анализировать венозную кровь.

При анализе на алкоголь, 1 мл крови, отобранной из пальца, переносят по 0,5 мл во флаконы, содержащие по 0,5 мл раствора 50% трихлоруксусной кислоты. В этих случаях исследование должно проводиться не позднее 1 часа от момента отбора пробы. В других случаях пробы должны быть заморожены.

Слюна. Отобранную пробу слюны центрифугируют и замораживают для замедления ферментативной активности.

Поскольку наркотическое вещество, находящееся в водном растворе плазмы пассивно диффунцируют в слюну, существует определенная корреляция между концентрациями наркотиков в слюне и плазме. В слюне содержатся белковые соединения (альбумины, липопротеиды и др.), которые могут принимать участие в связывании наркотических средств.

Общие правила, меры предосторожности хранения и транспортировки биологических проб. Как указывалось выше, все биологические образцы для замедления энзиматической активности необходимо хранить в холодильнике, а кровь и слюну в морозильной камере.

Чтобы уменьшить поглощение анализируемого вещества стенками стеклянной посуды, отбор и хранение проб лучше всего осуществлять. в полиэтиленовых, полипропиленовых или тефлоновых флаконах с завинчивающимися пробками из этого же полимера. В случае отсутствия таковых, хранить пробы можно в пенициллиновых склянках с резиновыми пробками, обжатыми алюминиевыми колпачками. При этом надо иметь в виду возможную потерю веществ за счет поглощения стенками стеклянной посуды и загрязнение пробы от резиновых пробок.

На всех отобранных пробах указываются фамилия, имя, отчество и возраст обследуемого, время отбора пробы, предварительный диагноз, способ отбора и номер пробы, наименование вещества, на которое необходимо произвести исследование.

Особенности анализа биообъектов на наличие наркотиков у живых лиц. Определение наркотических, психотропных и сильнодействующих веществ в биологических пробах проводят с целью установления факта их употребления. Быстро меняющаяся ситуация в области нелегального оборота наркотиков привела к резкому увеличению числа исследований наркотических и одурманивающих веществ, выполняемых в последние годы химико-токсикологическими лабораториями.

Для определения наркотических и психотропных веществ чаще всего используется моча, как наиболее информативный биообъект исследования. Образец мочи обычно может быть по­лучен в достаточном количестве, а концентрация психоактивных веществ или их метаболитов в нем, как правило, относительно высокая. К недостаткам этого биообъекта следует отнести возможность фальсификации образца. Наиболее типичные способы фальсификации: разбавление, подмена или загрязнение образца. Для установления факта употребления наркотика, спустя недели или месяцы, следует провести исследование волос и ногтей. В табл. 1 приведены данные литературы о времени возможного выявления часто используемых наркотических и психотропных веществ и некоторых их метаболитов в моче.

В соответствии с требованиями надежности, достоверности и доказательности результатов анализов, а также рекомендациями ВОЗ и об­щепринятыми мировыми стандартами, лабораторное исследование на наличие наркотических веществ должно состоять из двух этапов: предварительного (скринингового) и подтверждаю­щего.

Согласно международным правилам методы опре­деления наркотиков разделяют на 3 категории (табл. 2).

Предлагаются следующие варианты их использования:

• А + (А или В, или С);

• В + В + (В или С).

Комбинированные методы (ГХ-МС) рассматриваются как два раздельных метода.

В настоящее время наибольшее распространение в ХТА наркотических и психотропных ве­ществ при скрининговых исследованиях получили иммунохроматографический анализ (ИХА) на тест-полосках, ПФИА и ИФА. Современные ИХМ отличаются высокой чувствительностью, простотой и экспрессностыо исполнения, одновременно позволяют анализировать большое число проб, не требуя дополнительной или специальной их очистки или концентрирования и поэтому удобны для скрининг-диагностики. При получении положительно­го результата, т.е. когда концентрация вещества превышает пороговую, необходимо провести дальнейшее исследование образца мочи подтверждающими альтернативными методами. При отрицательном результате проведения дальнейшего исследования не требуется.

Ограничения на применение мочи и крови в качестве объектов исследования на присутс­твие физиологически активных веществ в организме человека:

• быстрое разложение, как самих образцов, так и исследуемых веществ, что обусловливает необходимость проведения исследований в возможно короткие сроки после их отбора;

• сложности в интерпретации результатов при обнаружении веществ в количествах, близких к пределу их обнаружения;

• узкий временной интервал, в течение которого возможно обнаружение вещества;

• высокая вероятность ложпоположительного результата в случае случайного или предумыш­ленного загрязнения образца.

Альтернативными объектами для определения наркотиков являются волосы, ногти и пото-жировые выделении кожи.

Необходимо проводить раздельное определение веществ, адсорбированных поверхностью этих объектов, и веществ, находящихся in vivo. В случае обнаружения наркогиков на поверхности ис­следуемых объектов следует провести процедуру отмывки с обязательным контролем чистоты. Например, после употребления наркотиков их концентрация на поверхности кожи, волос и ногтей обычно составляет 10^-6 — 10^-7 г, а после отмывки поверхностных загрязнений 10^-8 — 10^-11 г.

Предложены (Симонов Е.А. и др., 2000) следующая схема пробоподготовки образцов кожи, волос и ногтей и методы определения в них наркотиков (рис. 1).

Особенности анализа объектов небиологического происхождения на наличие наркотиков. Разнообразие видов и форм контролируемых веществ, а также действия их производителей (противозаконного рода деятельность), направленные на маски­ровку и сокрытие своей продукции, обусловливают специфические аспекты криминалистичес­кого анализа.

Для отнесения того или иного объекта к какому-либо виду наркотиков с целью установле­ния мер контроля над его оборотом требуется проведение исследований этого объекта несколь­кими независимыми методами. По сложившейся международной и отечественной практике во многих случаях достаточно 2—3 методов. Иногда при анализе сложных смесей число методов значительно увеличивается.

Перед экспертом после отнесения им того или иного образца вещества, изъятого из неза­конного оборота, к наркотическим средствам или психотропным веществам, обычно встают следующие вопросы: составлял ли ранее этот образец единую массу с другими образцами, изъятыми у данного субъекта? существует ли связь между этими образцами и каким-либо ус­тановленным дилером? если такая связь существует, то какую полезную информацию можно получить о цепи распространения наркотика на местном, региональном или международном уровне? кустарного или заводского производства данные образцы? возможно ли установить источник, в том числе регион, производства наркотика? какие методы применялись для его производства? какие реактивы и прекурсоры при этом использовались?

Для решения этих вопросов эксперт на основе исследования предоставленных образцов наркотика должен:

- установить специфические связи между образцами наркотика и сравнить их с результатами исследований поступавших ранее образцов;

- классифицировать результаты на связанные между собой группы, принимая во внимание всю совокупность образцов, имеющихся в его распоряжении.

Классификация аналитических методов базируется на принципах обязательного получения полной информации о структуре анализируемого вещества с помощью комплекса методов и рекомендована ведущими экспертными подразделения США, Великобритании, Японии, Гер­мании и ряда других стран, а также группой экспертов ООН.