Рекомендации к составлению протокола

Результаты реакций зафиксировать в таблице. В выводах указать, из чего состоят нуклеопротеины и их простетическая часть – нуклеиновые кислоты.

Наименование продуктов гидролиза	Употребляемые реактивы и температурные условия	Что наблюдается	Чем обусловлена реакция

4.1.2. Изучение химического состава рибонуклеопротеинов дрожжей

Реактивы и материалы: дрожжи, 10%-ный раствор серной кислоты, дистиллированная вода, Реактивы и материалы для определения составных частей нуклеотидов.

Оборудование и посуда: широкие пробирки, капельницы, стаканы, пробка с обратным воздушным холодильником, водяная баня, воронка для фильтрования, бумажные фильтры.

Порядок выполнения работы

200 мг дрожжей помещают в широкую пробирку и до­бавляют 5 мл 10%-го раствора серной кислоты и 5 мл дистиллированной воды. Перемешивают и закрывают пробкой с обратным воздушным холодильником. Пробирку помещают на кипящую водяную баню и кипятят при сла­бом нагревании 1 час. Затем пробирки охлаждают, филь­труют содержимое и с фильтратом (гидролизатом) прово­дят реакции на составные части нуклеотидов.

а) Биуретовая реакция на белок

К 5-6 каплям гидролизата прибавляют 10 капель 10% -го раствора NaOH и 1 каплю 1%-го раствора сульфата меди. При наличии белка жидкость окрашивается в розо­во-фиолетовый цвет.

б) Серебряная проба на пуриновые основания

К 0,5 мл гидролизата добавляют аммиак до щелочной реакции на лакмус и 0,5 мл аммиачного раствора оксида серебра. Через 5 мин при стоянии выпадает небольшой хлопьевидный осадок серебряных соединений пуриновых оснований.

в) Реакция на пентозы

К 0,5 мл гидролизата добавляют 0,5 мл 10%-го ра­створа NaOH и по каплям раствор сульфата меди до обра­зования гидрата окиси меди (избегать избытка). Нагрева­ют до кипения. В случае присутствия моносахаридов (пентоз) образуется красный осадок закиси меди.

г) Молибденовая проба на фосфорную кислоту

К 0,5 мл гидролизата прибавляют равный объем мо­либденового реактива и кипятят несколько минут. Жид­кость окрашивается в лимонно-желтый цвет. При охлаж­дении образуется желтый осадок фосфорно-молибденово-кислого аммония.

4.2. Хромопротеины

Хромопротеины состоят из простого белка и простетической группы, которая придает определенный цвет всему соединению. В организме многие из них являются катализаторами ряда важнейших окислительно-восстановительных процессов. Представителем хромопротеинов может служить кислородпереносящий пигмент эритроцитов крови млекопитающих гемоглобин.

При гидролизе гемоглобина в присутствии кислорода (на воздухе) гем освобождается в виде гематина, где железо трехвалентно. У гематина третья валентность железа связана с гидроксильной группой.

При действии на гемоглобин концентрированной уксусной кислоты в присутствии NaCl из гемоглобина образуются кристаллы гемина.

4.2.1. Открытие железа в гемоглобине

Реактивы и материалы: дефибринированная кровь, азотная кислота, концентрированная, соляная кислота, не содержащая железа, 10% раствор, калии железистосинеродистый, 5% раствор, калий роданистый, 5% раствор.

Оборудование и посуда: небольшая фарфоровая чашка (можно заменить фарфоровым черепком или крышкой тигля), тигельные щипцы, штатив с пробирками, капельницы.