12.2.7. Обнаружение стеролов в растительном масле

Реактивы и материалы: подсолнечное масло, хлороформ, смесь серной кислоты с формалином, уксусный ангидрид.

Оборудование и посуда: пробирки, пипетки.

Порядок выполнения работы

В сухую пробирку вносят 2 капли подсолнечного масла, 20 капель хлороформа. Добавляют 20 капель смеси серной кислоты с формалином и взбалтывают. Раствор разделяется на два слоя: хлороформный (вишневого цвета) и серной кислоты (красно-коричневого цветя с зеленой флуоресценцией). Из верхнего хлороформного слой отбирают 5-6 капель в сухую пробирку, добавляют 1-2 капли уксусного ангидрида и наблюдают появ­ление синего окрашивания, переходящего в зеленое.

Раздел 2 работа № 13. Исследование ферментов дыхательной цепи

13.1. Исследование действия каталазы крови

Каталаза катализирует разложение перекиси водоро­да на молекулярный кислород и воду. По химической природе каталаза является геминферментом, так как в состав простетической группы этого фермента входит гем:

2Н₂О₂ О₂ + 2Н₂О

Каталаза содержится во всех тканях и жидкостях ор­ганизма. Биологическая роль каталазы заключается в обезвреживании перекиси водорода путем разложения ее на воду и молекулярный кислород. Перекись водоро­да может образоваться в организме во время течения окислительно-восстановительных процессов.

Реактивы и материалы: кровь, перекись водорода, 1% раствор.

Оборудование и посуда: штатив с пробирками, капельницы.

Порядок выполнения работы

В пробирку наливают 10—15 капель 1% раствора перекиси водорода и добавляют каплю крови. Жидкость вспенивается, так как происходит бурное выделение пузырьков кислорода. Результаты опыта заносятся в таблицу.

№ п/п	Ферменты	Субстрат	Реакция, катализируемая ферментом	Выявление действия ферментов

13.2. Качественное определение активности сукцинатдегидрогеназы мышц

Дегидрогеназа янтарной кислоты (сукцинатдегидрогеназа) окисляет янтарную кислоту (сукцинат) в фумаровую (фумарат). Коферментом в этой реакции служит флавинадениндинуклеотид (ФАД).

В условиях опыта в качестве акцептора водорода при окислении сукцината используется 2,6-дихлохфенолиндофенол, его натриевая соль.

В водном растворе окисленная форма 2,6-дихлорфенолиндофенола окрашена в синий цвет. Восстановленная форма этого соединения бесцветна. Активность сукцинатдегидрогеназы мышц определяют, добавляя к мышечной кашице растворы янтарной кислоты и натриевой соли окисленной формы 2,6-дихлорфенолиндофенола. Если сукцинатдегидрогеназа активна, интенсивность синей окраски ослабляется благодаря образованию бесцветной восстановленной формы 2,6-дихлорфенолиндофенола.

Реактивы и материалы: мышцы, 2,6-дихлорфенолиндофенол, 0,001 N раствор, М/15 фосфатный буфер, рН 7,4, гидроксид натрия, 0,1 N раствор, янтарная кислота, 5% раствор.

Оборудование и посуда: пипетка на 5 и 1 мл, капельницы, пробирки, термостат, весы, ножницы, ФЭК.