11.1.4. Роль сывороточного альбумина в транспорте высших ук ирных кислот в крови

Кровь всегда содержит некоторое количество неэстерифицированных (свободных) высших жирных кислот, появляющихся при ферментативном расщеплении липазой липидов пищи и жировых депо организма. Высшие жирные кислоты, не растворимые в воде, транспортируются в плазме крови главным образом в виде комплексов с альбуминами.

Опыт заключается в сравнении растворимости свободных жирных кислот и их комплексов с сывороточным альбумином. Комплекс возникает при взаимодействии растворимой натриевой соли высших жирных кислот (мыло) с альбумином. При добавлении соляной кислоты натрий вытесняется и образуются свободные жирные кислоты:

R—COONa + НСl → R–COOH + NaCl

В комплексе с сывороточным альбумином высшие жирные кислоты остаются в растворе, а в отсутствие альбумина выпадают в осадок. Следует избегать избытка соляной кислоты, которая, вызывая денатурацию белка, может нарушить его способность к комплексообразованию.

Реактивы и материалы: натриевое мыло, 1% раствор, сыворотка крови, соляная кислота, 1% раствор.

Оборудование и посуда: штатив с пробирками, капельницы.

Порядок выполнения работы

1. В две пробирки вносят по 6 капель раствора мыла. В первую добавляют 20 капель сыворотки крови, во вторую - столько же воды. Пробирки слегка встряхивают.

2. В пробирку с добавленной водой вливают по каплям (1—2 капли) 1% раствор соляной кислоты только до появления осадка свободных жирных кислот.

3. В пробирку с сывороткой крови приливают такое же количество кислоты. Жирные кислоты не выпадают в осадок, так как образуют с сывороточным альбумином комплексное соединение.

Рекомендации к составлению протокола

Результаты исследования записать и обосновать различия в растворимости свободных жирных кислот и их комплексов с альбумином крови, а также указать на значение комплексообразования.

11.2. Фосфолипиды

Фосфолипиды (фосфатиды) относятся к липоидам. В их состав входят: фосфорная кислота, высокомолекулярные насыщенные и ненасыщенные жирные кислоты, альдегиды высших жирных кислот, спирты (глицерин, инозит, сфингозин) и азотистые основания (холин, этаноламин, серии). Фосфолипиды, входя в состав всех клеточных мембран, содержатся в каждой клетке живого организма, особенно много их в нервной ткани и в желтке яиц. Фосфолипиды обладают способностью образовывать с белками сложные комплексы — липопротеины.

11.2.1. Определение общих фосфолипидов в сыворотке крови по фосфору

Фосфолипиды осаждают трихлоруксусной кислотой вместе с белками крови. Полученный осадок минерализуют и в остатке определяют неорганический фосфор. О содержании фосфолипидов в сыворотке крови судят косвенно по количеству фосфорной кислоты, находимой колориметрически.

Реактивы и материалы: сыворотка крови, трихлоруксусная кислота, 10% раствор, хлорная кислота, 57% раствор, молибденовокислый аммоний, 4% раствор, рабочий раствор аминонафтолсульфоновой кислоты – эйконогена, рабочий стандартный раствор однозамещенного фосфорнокислого калия, содержащий в 1 мл 0,01мг фосфора.

Оборудование и посуда: микропипетка на 0,2 мл, пипетки на 1, 2, 5 и 10 мл с делениями, пробирки обычные, пробирки центрифужные, центрифуга, стеклянные бусинки, песчаная баня, фотоэлектроколориметр.