Рекомендации к составлению протокола

Результаты работы на хромопротеины, фосфопротеины и гликопротеины оформить в виде таблицы.

Наименование сложного белка	Простети-ческая группа	Химическая структура простетической группы	Реакции, характерные для простетической группы	Что наблюдается	Чем обусловлена реакция

4.4.2. Реакция с азотной кислотой

Реакция с азотной кислотой является высокоспецифичной и высокочувствительной. Она получила широкое применение при клинических исследованиях мочи на присутствие в ней белка (проба Геллера).

Реактивы и материалы: раствор белка или разбавленная сыворотка крови, азотная кислота, концентрированная, серная кислота, концентрированная, соляная кислота, концентрированная.

Оборудование и посуда: штатив с пробирками, капельницы.

Порядок выполнения работы

1. В пробирку наливают 1 мл концентрированной азотной кислоты и затем, сильно наклонив пробирку (под углом 45°), осторожно приливают по стенке равный объем раствора белка. В месте соприкосновения двух жидкостей появляется белый аморфный осадок белка в виде кольца (проба Геллера). Осторожно встряхивают пробирку и добавляют избыток азотной кислоты. Осадок не исчезает.

2. То же проделывают, взяв вместо азотной кислоты концентрированную серную и соляную кислоты. Отличие заключается в том, что образовавшиеся осадки белка в избытке серной и, соответственно, соляной кислоты растворяются.

Работа № 5. Свойства ферментов

Ферменты — это белки, обладающие каталитической активностью. В клетках и жидкостях организма они выполняют роль биологических катализаторов, осуществляя свое действие путем снижения энергии активации.

5.1. Гидролиз крахмала α-амилазой слюны

α-Амилаза слюны относится к классу гидролаз. Специфическими субстратами α-амилазы являются полисахариды крахмал и гликоген. Для исследования действия α-амилазы слюны в качестве страта берут крахмал. Нерасщепленный крахмал образует с йодом комплекс синего цвета и не обладает восстановительной способностью, так как почти не имеет свободных альдегидных групп. α-Амилаза гидролизует -1,4-глюкановые связи в крахмале, гликогене и олигосахаридах, которые разрываются без определенного порядка. При гидролизе крахмала образуются последовательно промежуточные продукты: амилодекстрины (дают синее или фиолетовое окрашивание с йодом), эритродекстрины (красно-бурое окрашивание с йодом), ахродекстрины (не дают окрашивания с йодом), мальтодекстрины (не дают окрашивания с йодом). В качестве конечного продукта гидролиза под действием α-амилазы образуется смесь дисахарида мальтозы и моносахарида глюкозы. И мальтоза и глюкоза имеют свободные альдегидные группы, вследствие чего они обладают восстановительной способностью и открываются пробой Троммера.

Реактивы и материалы: разбавленная слюна (слегка ополаскивают рот дистиллированной водой для очищения его от остатков пищи, набирают новую порцию воды, примерно 15—20 мл и ополаскивают рот в течении 1—2 мин. собранную в стаканчик или пробирку жидкость профильтровывают и употребляют для анализа), крахмал, 1% раствор, свежеприготовленный., раствор йода в йодистом калии, гидроксид натрия, 10% раствор, сернокислая медь, 1% раствор.

Оборудование и посуда: штатив с пробирками, стаканчики, воронки с фильтром, пипетки, термостат или водяная баня, снабженная термометром, стеклянные палочки, капельницы.