Порядок выполнения работы

Два объема по 0,5 мл раствора внутреннего стандарта изобутанола переносят с помощью пипетки в две различные пробирки (7,4 мл), одна с маркировкой «извест­ный», другая – с маркировкой «неизвестный». Калиброван­ной пипеткой на 0,5 мл (Microchemical Specialities Company, Berkeley, Calif.) 0,5 мл рабочего стандарта этанола перено­сят в пробирку с маркировкой «известный». Пипетку промы­вают трижды раствором внутреннего стандарта для удаления всей неизвестной пробы. Затем вновь с помощью калиброван­ной пипетки 0,5 мл известной крови переносят в пробирку с маркировкой «неизвестный». Пипетку промывают трижды раствором внутреннего стандарта для количественного пере­носа всех неизвестных проб. С помощью шприца на 1 мкл (№ 7101 Hamilton Co, Whitter, Calif.) пробы объемом 0,5 мкл дублированно «известной» и «неизвестной» смеси вво­дятся в газовый хроматограф.

Газохроматографические условия. Используется одноколоночный газовый хроматограф, снабженный пламенно-иони­зационным детектором и самописцем на 1 мв. Колонка пред­ставляет собой спиральную трубку из нержавеющей стали длиной 1,7 м с наружным диаметром 0,25 дюйма, наполнен­ная 30% карбоваксом 20 М на промытом кислотой хромо-сорбе W (60/80 меш). Наполненная колонка может быть по­лучена от фирмы-изготовителя или наполнена в лаборатории добавлением 100 г хромосорба W (промытый кислотой, 60/80 меш) к раствору 30 г карбовакса 20 М в хлороформе. Избыток растворителя испаряют на паровой бане, а покры­тый материал нагревают в течение ночи в термостате при 105°С. Колонку наполняют этим материалом и кондициони­руют при 180°С потоком газа–носителя (азота). Другие газохроматографические условия: температура термостата 100 или 130°С; температура устройства для ввода пробы 160°С; диапазон 0,1; аттенюация 64; расход азота газ–носитель, во­дорода и кислорода 35 мл/мин, 28 мл/мин и 100 мл/мин со­ответственно.

Концентрацию спирта вычисляют по формуле C₂(H_X/H_S)x x(R_s/R_x)=Mr спирта/100 мл неизвестной пробы, где С₂ – концентрация стандартного раствора спирта в мг/100 (50 мг/100 мл использовалось в этой процедуре); Н_х – высо­та пика этанола из «неизвестной» крови; H_s – высота пика внутреннего стандарта изобутанола из «неизвестной» крови; R_x – высота пика этанола из «известного» раствора этанола и R_s – высота пика внутреннего стандарта изобутанола из «известного» раствора этанола.

С помощью этой процедуры Jain показал, что 1 – 60 мг спирта/100 мл крови дает линейный отклик детектора.

Работа № 32. Газохроматографическое определение лекарственных препаратов

Определение лидокаина, анестезина, новокаина и других лекарственных препаратов проводится на газовом хроматографе с пламенно–ионизационным детектором с последующим количественным расчетом методом абсолютной калибровки.

Реактивы и материалы: стандартные растворы лидокаина, анестезина, новокаина 1% водные или спиртовые растворы.

Оборудование и посуда: Хроматограф Цвет-500 или любой другой марки с пламенно – ионизационным детектором. Колонка хроматографическая с 3%SE-30 или 3%OV-17 (l = 3м, d = 3мм).

Подготовка к анализу.

На хроматографе Цвет-500 устанавливают необходимые режимы.

Расход газа – носителя – 60мл/мин

Расход воздуха – 300мл/мин

Расход водорода – 30мл/мин

Температура детектора – 220 ^°C

Температура колонки –200 ^°C

Температура испарителя – 250 ^°C