Порядок выполнения работы

Отмеряют 5 мл молока в мерную колбу на 200 мл, прибавляют до половины колбы дистиллированную воду, 5 мл раствора сульфата меди 2н. и 2 мл 1 н раствора гидроксида натрия, перемешивая жидкость после прибавления каждого реактива.

Доливают до 200 мл водой, снова перемешивают и оставляют для отстаивания на 20 минут в темноте.

Отстоявшуюся жидкость профильтровывают в сухую колбу через складчатый фильтр.

25 мл фильтрата переносят в коническую колбу на 250 мл с притёртой или резиновой пробкой, приливают 12,5 мл 0,1 н раствора йода и сейчас же при непрерывном перемешивании добавляют из бюретки 18 мл 0,1 н раствора гидроксида натрия.

Закрывают колбу пробкой и оставляют в темноте на 20 минут при комнатной температуре.

Прибавляют в колбу 4 мл 0,5 н раствора соляной кислоты, оттитровывают выделившийся йод 0,1н раствором гипосульфита натрия в присутствии 1% раствора крахмала. Титрование ведут медленно, сначала без прибавления индикатора (до получения светло-жёлтой окраски), затем прибавляют 1 мл 1% раствора крахмала и продолжают титрование до момента, когда от 1 капли раствора гипосульфита исчезнет синяя окраска.

Проводят холостую пробу, для чего в другую такую же колбу отмеривают 12,5 мл 0,1 н раствора йода, добавляют при непрерывном помешивании 18 мл 0,1 н раствора гидроксида натрия и, закрыв колбу пробкой, оставляют в темноте на 20 минут, а затем проводят определение как в первой колбе.

Расчёт результатов

Содержание лактозы в % находят по формуле:

Л = 0,873·(а - б)

где Л – содержание лактозы; а - количество 0,1 н раствора гипосульфита, пошедшего на титрование йода в холостой пробе, мл; б - количество 0,1 н раствора гипосульфита, пошедшего на титрование йода при определении в фильтрате, мл; 0,873 – поправка на количество лактозы, реагирующее с 1мл 0,1 н раствора йода, г.

Работа № 10. Выделение и анализ гликогена

Гликоген служит резервным углеводом животных и микроорганизмов. В организме животных гликоген содержится в печени, Значительно менее богата им мышечная ткань. В дрожжах содержание гликогена составляет до 30% (в сухом веществе).

В организме гликоген существует в двух формах: прочно связанный с белками (и потому извлекается из тканей трудно) и слабо связанный с белками (легко экстрагируется горячей водой и растворами трихлоруксусной кислоты).

Существуют два метода выделения гликогена. В первом случае используемую ткань обрабатывают 30% раствором гидроксида калия на кипящей водяной бане. При такой жесткой обработке ткани распадаются, большинство веществ гидролизуется, но гликоген не изменяется и может быть осаждён спиртом. Во втором случае гликоген извлекается 5% раствором уксусной кислоты. Но при этом трудно извлечь полностью гликоген, связанный с белками.

10.1. Выделение гликогена из дрожжей

Реактивы и материалы: пивные дрожжи, раствор сахарозы 20%, раствор трихлоруксусной кислоты 5% и 10%, кварцевый песок, этанол 65% и 96%, эфир, раствор Люголя.

Оборудование и посуда: термостат, центрифуга, фарфоровые ступка и пестик, конические колбы на 200 мл, стеклянные палочки, весы, бюксы, сушильный шкаф, предметные стекла.