Метод Гросс-Бильшовского-Лаврентьева (для выявления периферических нервов и нервных окончаний)

Фиксация материала в 10%-ном нейтральном формалине, лучше в смеси АФА. Срезы готовят методом замораживания .30—50 мкм.

Необходимые материалы

1. Жидкость АФА: неразведенный формалин, спирт 96° и 1%-ный раствор мышьяковистой кислоты. Составные части берут порог

1. Раствор азотнокислого серебра.

Приготовление раствора азотнокислого серебра: к любому количеству 20%-иого азотнокислого серебра добавляют по j-ный нашатырный спирт до тех пор, пока образу­ющийся хоричнево-бурып осадок при сильном взбалтывании и дальнейшем прибавлении нашатырного спирта не раство­ряется.

3. Раствор хлористого золотя.

4. 5%-пый раствор гипосульфита. ■

Ход окраски

после промывки срезов в дистиллированной воде (1— 2 мин) срезы помещают в 20%-ный раствор азотнокислого се­ребра на 1—30 мин. (время устанавливают опытным путем).

2. Переносят (минуя воду) в 20%-ный- формалин (4—5 см3 раствора) до отхождения мути.

3. Переносят в опалесцирующий раствор аммиачного серебра (к нему добавляют еще 25%-ного нашатырного спирта 1 —15 капель) в часовых стеклах. Процесс импрегнации наб­людают в микроскоп.

4. Срезы переносят в разведенный нашатырный спирт (1 часть 25%-ного нашатырного спирта и 2 части дистилли­рованной воды) на 10—15 мни.

5. Тщательно промывают в нескольких порциях дистилли­рованной воды в течение нескольких часов.

6. Переносят в слабый раствор хлорного золота (можно пользоваться золотохлористоводо родной кислотой) на 1/2—1

7. Помещают срезы в 5%-пый раствор гипосульфита на 5 — 10 мин

8. Тщательно промывают в дистиллированной воде (нес­колько часов).

9. Подкрашивают, по желанию, любыми красителями.

10. Обезвоживают, просветляют и заключают в бальзам.

Результаты окраски: элементы нервной системы выявляются в виде черных образований на общем светло-коричневом фоне.

Методы выявления калия, кальция, железа, меди

Выявление калия (методом Макаллума). Из свежей тка­ни готовят срезы на замораживающем микротоме и поме­щают еще замороженные срезы в реактив, составленный сле­дующим образом: к 20 г азотнокислого кобальта добавить 35 г азотнокислого натрия, долить 10 см³ ледяной уксусной кислоты и 65 см³ дистиллированной воды. Через несколько часов фильтруют и доливают водой до 100 см³. Время окрас­ки 0,5—1—2 часа, затем реактив отсасывают и несколько раз промывают срез очень холодной водой.

Срезы расправляют на предметном стекле и заключают в каплю глицерина — сернистого аммония (50 см³ 50%-ного глицерина+ 50 см³ сернистого аммония).

Результаты окраски: зерна калия черные.

Выявления кальция (методом Косса).

Фиксация материа­ла в 96° спирте, срезы замороженные или парафинированные. Помещают срезы на 0,5—1 час в 3%-ный раствор азотнокис­лого серебра, промывают в дистиллированной воде. Обраба­тывают 1—2 мин в 50% -ном растворе гипосульфита натрия, хорошо промывают в дистиллированной воде (3 раза сме­нить), ядра можно докрасить квасцовым кармином пли саф­ранином.

Результаты окраски: кальций, вначале желтый, переходит в черный цвет.

Существует более чувствительный метод Кретена с галло­вой кислотой и формалином (см. спец. руководство).

Выявление железа (метод с турнбулевой синью)

Фиксация материала в 10%-ном формалине, фиксаторе Буэна. Срезы замороженные или парафиновые. Срезы после дистиллированной воды поместить в насыщенный раствор сер­нистого аммония на 1—24 часа (светло-желтый цвет раство­ра), тщательно промыть дистиллированной водой, перенести на 10—20 мин в свежеприготовленную смесь равных частей 20%-ного раствора красной кровяной соли (Кз[Ре(СЫ₆)]) и 1%-ной соляной кислоты, промыть в дистиллированной во­де, докрасить ядра кармином или сафранином. Бальзам.

Результаты окраски: соли железа окрашиваются в синий цвет.

Выявление гемосидерина

Окрашивают срезы гематоксилин-эозином. При этой окраске гемосидерин имеет вид аморфных глыбок ржавого или бурого цвета. Следует также подчеркнуть, что при обыч­ной окраске срезов гемосидерин имеет сходство с меланином, липофусцином и формалиновым пигментом. Окраска срезов по Перлсу дает возможность отдифференцировать гемосидерин от других сходных пигментов.

Гистохимическая реакция гемосидерина в тканях по Перлсу

Необходимые материалы

1. Смесь Перлса: i %-ный раствор: желтой кровяной соли (железисто-синеро­дистого калия) — 2 г, воды дистиллированной — 100,0 см³. 2%-ный раствор: соляной кислоты— 1 см³, воды дистиллированной— 100 см³. Оба раствора смешивают в пропорции 1:1,5 перед упот­реблением.

2. Кармин Гренахера: кармина — 1,0, квасцов калийных — 5,0,

воды дистиллированной — 100 см³.

Кипятят 20 мин., после охлаждения фильтруют.

Выявление меди (методом Окомото). Фиксация в абсо­лютном спирте, можно и в нейтральном формалине. Срезы замороженные, парафиновые, целлоидиновые. Помещают срезы на 12—24 часа при 36° в реактив следующего состава: растворяют 0,1 г рубеановодородной кислоты в 100 см³ абсо­лютного спирта. Непосредственно перед употреблением сме­шивают 2—5 см³ основного раствора с 100 см³ 10%-ного вод­ного раствора уксуснокислого натрия. Затем ополаскивают в дистиллированной воде, ядерная окраска квасцовым карми­ном. Спирт, ксилол, бальзам.

Результаты окраски: соединения, содержащие медь в ви­де зеленовато-черных гранул.

Цитологические и цитогенетические методы

В настоящее время широко используются в лабораторной практике цитологические и цитогенетические методы исследо­вания.

Существует много методов окраски цитологических пре­паратов, наилучшим является метод по Папенгейму.

Окраска азур-эозииовой смесью по методу Папенгейма

Необходимые материалы

1. Краска-фиксатор Май-Грюнвальда.

2. Растворы красок азур II и эозина.

Азур II в количестве 1 г растворяют в 1 л дистиллирован­ной воды.

Эозин желтоватый (ВА или К) в количестве 1 г раство­ряют в 1 л свежепрокипяченой дистиллированной воды.

Рабочий раствор: на 1 мл дистиллированной воды при рН = 6,8 берется 4 капли основного раствора эозина и 4 капли основного раствора азур II. Количество воды отмеривается в зависимости от числа препаратов, подлежащих окраске. На каждый препарат расходуется около 3 мл красителя.

3. Дистиллированная вода.

Ход окраски

1. На нефиксированный мазок наливают краску Май-Грюнвальда на 3 мин.

2. Не сливая краски с мазка, добавляют такой же объем дистиллированной воды.

3. Через минуту краску с мазка сливают и, не ополаски­вая мазка, наливают на него рабочий раствор азурэозиновой смеси (3—15 мин).

1. Споласкивают в дистиллированной воде.

4. Высушивают мазок между фильтровальной бумагой.

Результаты окраски: ядра красновато-фиолетовые, цитоп­лазма лимфоидных клеток светло-синяя; лимфоидная азуровая зернистость ярко-пурпурно-красная; миэлоидная азуровая зернистость фиолетовая с коричневым оттенком; эритро­циты розовые.