Окраска по Маллори

Окраска по Маллори один из оригинальных способов ок­раски коллагеповых волокон. Фиксация в жидкостях Ценкера, Гелли.

Необходимые материалы

1. Литиевый кармин.

2. 1 %-ный солянокислый спирт (70°).

3. 0,1 %-ный водный раствор кислого фуксина.

4. 1 %-ный водный раствор фосфорно-молибденовой кислоты.

5. Водорастворимый раствор анилинового синего.

6. Оранж G.

7. Кристаллическая щавелевая кислота.

8. Дистиллированная вода.

Ход окраски

1. Срезы помещают в профильтрованный литиевый кармин на б—10 мин и более и, не споласкивая в воде, переносят в 1 %-ный солянокислый спирт (70°) на 3—5—10 мин.

2. Промывают в дистиллированной воде (3—5 мин).

3. Окрашивают в 0,1%-ном водном растворе кислого фуксина 2—3 мин.

4. Быстро споласкивают в воде.

5. Переносят (для протравливания) в 1 %-ный водный раствор фосфорно-молибденовой кислоты на 2—5 мин.

6. Быстро споласкивают в воде.

7. Окрашивают в свежефильтрованном красящем раство­ре следующего состава:

Анилиновый синий (водорастворимый препарат —0,5 г.

Оранж —2,0

Щавелевая кислота (кристаллическая) — 2,0

Дистиллированная вода— 100,0 мл.

Смесь нагревают до кипения, охлаждают и фильтруют.

Продолжительность окраски 1—2 мин.

8. Промывают в воде 1/2—1 мин.

9. Дифференцируют в 96° спирте в течение нескольких минут (3—5), контролируя под микроскопом, пока отчетливо выступят волокнистые структуры.

10. . Проводят через абсолютный спирт, просветляют в кси­лоле и заключают в бальзам.

Результаты окраски: коллагеновые волокна темно-синие, ядра, эритроциты и эластические волокна красные; амилоид, гиалин и слизь — синие, мышечная ткань оранжевая, невроглия и ганглиозные клетки красновато-фиолетовые.

Окраска эластических волокон резорцинфуксином Вейгерта

Фиксация материала в абсолютном спирте, формалине.

Необходимые материалы

1. Литиевый кармин Орта. К 100 мл насыщенного раствора углекислого лития добавляют 2,5 г. кармина, кипятят 5—10 мин; и после охлаждения фильтруют через фильтроваль­ную бумагу.

2. 1%-ный солянокислый спирт (70°).

3. Этиловый спирт-ректификат 70°—80°.

4. Раствор фуксилина. В 200 мл дистиллированной воды растворяют 2 г основного фуксина и 4 г резорцина. Нагрева­ют и добавляют 25 мл оффицинального раствора полуторахлористого железа. Кипятят 5 мин, помешивая, охлаждают и фильтруют. Фильтрат выбрасывают, а фильтр с оставшимся осадком кладут в чашку, в которой кипятили смесь. Добавляют 200 мл 96° спирта и осторожно нагревают до кипения на водяной бане. Спиртовый раствор краски охлаждают и фильтруют в градуированный цилиндр, доливают 200 мл 96° спиртом и добавляют 4 мл крепкой соляной кислоты (уд. вес 1,16—1,19).

Ход окраски

1. Срезы окрашивают в ядерном красителе, лучше литие­вом кармине Орта 10—15 мин.

2. Переносят в 1%-ный солянокислый спирт (70°) на 5—15 мин.

1. Споласкивают срезы в 70°—80° спирте.

3. Помещают в профильтрованный раствор фуксилина на 20—30 мин.

4. Промывают в 70°—80° спирте 1—2 мин.

5. Дифференцируют в 1%-ном солянокислом спирте под контролем микроскопа до четкого выявления эластических волокон (1—3 мин.).

6. Спирты, ксилол, бальзам.

Результаты окраски: ядра клеток красные, эластические волокна темно-синие.

Импрегнация серебром ретикулярной стромы. Способ Фута

Фиксация материала в 15—20%-ном растворе формалина. После фиксации промывание в проточной воде 24—48 часов, а затем несколько часов в дистиллированной. Срезы получают на замораживающем микротоме. Работать только с химичес­ки чистыми реактивами, посуда безукоризненно чистая, пере­носят срезы только стеклянными иголками.

Необходимые материалы

1. 0,25%-ный водный раствор марганцевокислого калия.

2. 5%-ный раствор щавелевой кислоты.

3. 2%-ный раствор азотнокислого серебра.

4. Раствор аммиачного серебра: на каждые 5 мл 10%-ного раствора AgNO₃ прибавляют 4—5 капель 40%-ного водного раствора (гидрата окиси аммония) NH₄OH. Образуется осадок (темно-бурый) гидрата окиси серебра. Осадок растворяют 25%-ным нашатырным спиртом, добавляя его по каплям, хорошо взбалтывая. На 5 мл 10%-ного AgNO₃ необходимо 15—25 капель 25%-ного NH₄OH.

5. Гидрат окиси аммония.

6. 5%-ный раствор формалина.

7. 0,5—1%-ный раствор хлорного золота.

8. 5%-ный водный раствор гипосульфита.

9. Дистиллированная вода.

Ход окраски

1. Замороженные срезы из дистиллированной воды переносят в 0,25%-ный водный раствор марганцевокислого калия на 5—10 мин.

2. Споласкивают в водопроводной воде.

3. Выдерживают в 5%-ном растворе щавелевой кислоты 15—30 мин (до побеления срезов).

4. Тщательно промывают (20—30 мин) в большом количестве дистиллированной воды.

5. Выдерживают в темноте 48 часов в 2%-ном растворе азотнокислого серебра (AgNO₃).

6. Быстро (3—5 сек) споласкивают в дистиллированной воде.

7. Выдерживают 15—20 мин в свежеприготовленном и профильтрованном растворе аммиачного серебра.

8. Споласкивают в дистиллированной воде (5—15 сек, вре­мя выбирают эмпирическим путем).

9. Помещают в 5%-ный раствор формалина на 15—30 мин

10. Тщательно промывают в водопроводной воде.

11. Перекладывают в 0,5— 1%-ный раствор хлорного золо­та (АиС1₃) на 5—10 мин.

12. Промывают в водопроводной воде (10—15 мин).

13.Обрабатывают в 5%-ном водном растворе гипосульфита 1—3 мин. Контролируют под микроскопом, споласкивая в воде.

14. Тщательно промывают в водопроводной воде — от нескольких часов до суток.

15. Ядра клеток докрашивают квасцовым кармином или гематоксилином.

Проводят через спирт, карбол-ксилол и заключают в бальзам. Результаты окраски: ретикулярные волокна черные, коллагеновые волокна фиолетовые, коричневые или серовато-черные.