Занятие №13. Тема: Бактериофаги, их природа, строение, формы существования, механизмы взаимодействия с бактериальными клетками Вопросы для подготовки

1. Бактериофаги, их природа, строение, формы существования.

2. Типы взаимодействия бактериофагов с бактериальной клеткой. Лизогения, лизогенная конверсия.

3. Методы культивирования и титрования бактериофагов (по Грациа и Аппельману).

4. Практическое использование бактериофагов в диагностике:

а). для индикации бактерий

б) для идентификации бактерий

в) для установления идентичности культур бактерий, выделенных из разных источников, при эпидемиологическом анализе ситуации

5. Лечебно-профилактическое использование бактериофагов.

Задания к практической работе студентов

Задание№1.

Провести индикацию и титрование дизентерийного бактериофага.

Для приготовления биопрепаратов из бактериофагов используют в основном три источника:

1. лизогенные культуры бактерий

2. фекалии выздоравливающих больных

3. сточные воды

Допустим, необходимо выделить дизентерийный бактериофаг из сточных вод. На первом этапе проводят индикацию дизентерийного бактериофага в сточных водах методом фаговой дорожки: а) на чашку Петри с МПА засевают газоном культуру дизентерийных бактерий, затем на поверхность посева закапывают фильтрат сточной воды стекающей каплей. Посевы инкубируют в термостате в течение 18 часов. Учесть результаты по готовым демонстрационным посевам.

При положительном ответе проводят определение исходного титра бактериофага по Аппельману.

б) Для титрования фага готовят его десятикратные разведения, в которые добавляют эталонную культуру дизентерийных бактерий ( 2 млрд. м.т. в 1 мл) Пробирки помещают в термостат на сутки.

Учесть исходный титр бактериофага.

в) Если титр недостаточен ( необходимый титр для лечебных бактериофагов должен быть не менее 10-8), бактериофаги несколько раз пассируются на дизентерийных клетках, а затем вновь титруются. Учесть титр бактериофага после пассирования, сделать заключение.

Примечание: при достижении необходимого титра бактериофаг стерилизуется фильтрованием через бактериальные фильтры, проходит контроль на стерильность и расфасовывается в стерильные ампулы или флаконы.

Задание №2.

По готовым посевам определить титр дизентерийного бактериофага по Грациа. Для этого готовят десятикратные разведения фага, которые смешивают со стандартной культурой дизентерийных бактерий в объеме 0,1 мл каждое разведение бактериофага и расплавленным и слегка остуженным агаром. Полученную смесь высевают на чашку Петри с МПА вторым агаровым слоем и после застывания смеси инкубируют в термостате 24 часа. Подсчитать количество «негативных колоний» бактериофага, умножить на степень разведения фага и объем из расчета на 1мл. Это и будет титр бактериофага по Грациа.

Задание№3.

Провести идентификацию холерных бактерий по фаголизабельным свойствам. Для этого выделенную чистую культуру бактерий засевают газоном на чашку Петри с щелочным агаром и закапывают на поверхность посева разные холерные батериофаги ( С4 и Эль-Тор2). Посевы инкубируют в термостате сутки. Учесть результаты посева и сделать заключение.

Задание№4.

В отделении возникла вспышка стафилококковой инфекции . При бактериологическом исследовании больных и сотрудников(рач К., санитарка Л., медсестра А.) был выделен гноеродный стафилококк. Провести фаготипирование гноеродного стафилококка с помощью типовых стафилококковых бактериофагов и установить источник инфекции для больных. Результаты зарисовать и ответить на следующие вопросы:

1. Какой применен метод диагностики?

2. Что такое типовые бактериофаги?

Занятие№14