Техника постановки реакции

Каплю аллантоисной жидкости нанести на предметное стекло, добавить одну каплю 0,5 % взвеси эритроцитов курицы, перемешать. При наличии вирусов в течение 5 минут наблюдается агглютинация эритроцитов.

Задание № 2

Учесть реакцию торможения гемагглютинации (РТГА) для определения вида вируса.

Какой метод диагностики?

Какой вирус обнаружен в РТГА?

С какой целью поставлены контроли?

Закончено ли исследование?

Реакция поставлена по схеме:

Ингредиенты (мл)	Опыт 1	Опыт 2	К. вируса	К. эритр.	К. сыв.А	К. сыв.В
Аллантоисная жидкость Противогриппозная сыворотка типа А сыворотка типа В Физиологический р-р	0,2 0,2 — —	0,2 — 0,2 —	0,2 — — 0,2	— — — 0,4	— 0,2 — 0,2	— — 0,2 0,2
Инкубация в термостате 15 минут
2 % взвесь эритроцитов курицы	0,4	0,4	0,4	0,4	0,4	0,4
Инкубация в термостате 15 минут
Результаты

«+» – наличие гемагглютинации; «–» – отсутствие гемагглютинации.

Задание№ 3

Учесть демонстрационный вариант РТГА.

Определить наличие и количество антител в парных сыворотках больного с клиническим диагнозом «Грипп».

№ пробирок	1	2	3	4	5	6	7
Разведения сывороток	1:10	1:20	1:40	1:80	1:160	1:320	Контроль
3 день
10 день

«+» – гемагглютинация; «–» – задержка гемагглютинации.

Титром сыворотки называется........

Какой метод диагностики?

Зачем исследовались парные сыворотки больного?

Какова природа выявленных антител?

Вывод.

Задание № 4

Провести идентификацию аденовирусов в культуральной жидкости, полученной при заражении культуры ткани материалом от больных. С культуральной жидкостью поставлена РСК.

Какой метод диагностики?

Какой антиген аденовирусов определили в РСК?

Можно ли определить тип вируса?

Закончено ли исследование?

Схема постановки РСК

Ингредиенты	1 опыт	2 опыт	К. сыв.	К.вирусосод..мат.б-го С	К.вируссод.мат.б-го М.
Аденовирусная сыворотка	0,25	0,25	0,25
Вируссод.мат.б-го С	0,25	-	-	0,25	-
Вируссод.мат.б-го М	-	0,25	-	-	0,25
Комплемент	0,25	0,25	0,25	0,25	0,25
Физиологический р-р	-	-	0,25	0,25	0,25
Инкубация в термостате 30 минут
Гемолитическая система	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5
Результаты:

Задание № 5

Изучить биопрепараты, используемые для специфической профилактики, лечения и диагностики респираторных вирусных инфекций. Данные внести в таблицу:

№	Название	Действующее начало	Механизм действия	Назначение

Занятие № 14

Тема. Микробиология заболеваний, вызванных пикорна- и поксвирусами. Вирусы гепатитов А,В,С,Д,Е.

Актуальность темы занятия

Пикорнавирусы, являющиеся возбудителями обширной группы вирусных инфекций, включают в себя возбудителей полиомиелита, энтеровирусных заболеваний (вирусы Коксаки и Экхо, гепатита А) и риновирусных инфекций. Эти вирусы вызывают разнообразные поражения человеческого организма, а полиомиелит является калечащей инфекцией. Необходимость изучения этих инфекций диктуется их значительным удельным весом в структуре инфекционной патологии, а также тем, что вопросы их диагностики и особенно профилактики является важным звеном здравоохранения.

Основной представитель группы поксвирусов – вирус оспы, продолжает оставаться предметом изучения, несмотря на то, что 1982 год является годом ликвидации оспы. Это объясняется тем, что группа поксвирусов имеет целый ряд родственных вирусу оспы представителей, а вопросы изменчивости вируса являются пока нерешенной проблемой и не исключено, что в экологии вирусов этой группы место вируса натуральной оспы занимает один из родственных представителей поксвирусов.

Вопросы для подготовки

1. Классификация и общая характеристика семейства пикорнавирусов, распространение в природе.

2. Энтеровирусы (полиомиелит, Коксаки, Экхо, гепатит А): основные свойства, вызываемые заболевания, их патогенез и пути инфицирования человека. Методы лабораторной диагностики – вирусологичекий и иммунологические. Диагностические биопрепараты.

3. Специфическая профилактика и терапия полиомиелита: биопрепараты, их состав, механизм действия. Контроль эффективности вакцинации.

4. Риновирусы, свойства, вызываемые заболевания, лабораторная диагностика.

5. Поксвирусы, их классификация и общая характеристика. Лабораторная диагностика натуральной оспы, специфическая профилактика.

6. Вирусные гепатиты: А, В, С, Д, Е. Их классификация, характеристика и патогенез. Методы диагностики и специфической профилактики гепатитов А, В и С.

Практическая работа

Задание № 1

У ребенка 3 лет с клиническим диагнозом «Полиомиелит» взяты на исследование фекалии, засеяны на культуру ткани, проведена идентификация вируса. Учесть результаты.

Какой использован метод диагностики?

С какой целью исследуются фекалии больного?

Обнаружен ли вирус в культуре ткани?

Каким способом обнаруживается вирус?

Какая реакция и какой метод ее учета использованы при идентификации вируса?

Закончено ли исследование?

Сделать заключение.

Задание № 2

С сыворотками детей, привитых от полиомиелита, 3 недели спустя поставлена реакция нейтрализации с комплексным антигеном вируса полиомиелита. Учесть результаты реакции. Диагностический титр 1:8.

Какой метод исследования использован?

С какой целью исследованы сыворотки?

Эффективна ли проведенная вакцинация?

Сделать заключение.

Задание № 3

У больных А. и К. с подозрением на энтеровирусную инфекцию взяты парные сыворотки и поставлена реакция нейтрализации с антигенами вирусов Коксаки. Учесть результаты реакции.

Какой применен метод диагностики?

Зачем исследуют парные сыворотки?

Подтверждается ли у этих больных энтеровирусная инфекция?

Сделать заключение.

Задание № 4

В населенном пункте К. возникла вспышка заболеваний у взрослых и детей, использовавших для питья сырую воду. Продромальный период напоминал гриппоподобные заболевания, затем развились симптомы, характерные для желудочно-кишечных инфекций, моча стала темной, а кал светлый. Возникло подозрение, что вспышка вызвана вирусом гепатита А. С сыворотками трех заболевших поставлена ИФА для обнаружения IgMк вирусу гепатита А. Учесть результаты реакции.

Какой использован метод диагностики?

Какова методика постановки ИФА на поиск антител?

Почему ищем IgM?

Закончено ли исследование, и подтверждается ли подозрение на гепатитА?

Сделать заключение.

Задание № 5

В инфекционную клинику поступили больные В. и Д. с подозрением на вирусный гепатит В. С сыворотками крови этих больных поставлена ИФА для выявления HBsAgиHBeAg. Учесть эту реакцию и сделать заключение.

Какой метод диагностики использован?

Какие биопрепараты используются для постановки ИФА?

Как трактовать полученные результаты?

Сделать заключение.

Задание № 6

Изучить биопрепараты, используемые для профилактики, лечения и диагностики полиомиелита, вирусных гепатитов. Данные оформить в таблицу:

№	Название	Активное начало	Механизм действия	Назначение

Занятие № 15

Тема. Микробиология заболеваний, вызываемых арбо-, рабдо- и герпесвирусами

Актуальность темы

Значение арбовирусов в патологии человека огромно: около 100 видов являются возбудителями различных заболеваний. Все арбовирусы передаются человеку при укусе членистоногих. Для арбовирусов характерна природная очаговость, вирус циркулирует между членистоногими и позвоночными. В Алтайском крае также имеются природные очаги этой инфекции и будущие врачи должны уметь решать вопросы лечения, диагностики и профилактики арбовирусных инфекций.

Вирусы бешенства также широко распространены в природе, причем актуальность изучения этой инфекции, вопросы ее эпидемиологии и профилактики в последние десятилетия не только не снижаются, но и возрастают.

Вопросы для подготовки

1. Тогавирусы: классификация, общая характеристика семейства, вызываемые заболевания.

2. Арбовирусы из семейства флавивирусов, их экология, эпидемиология и патогенез вызываемых заболеваний, общая характеристика, распространение в природе, патогенез клещевого энцефалита.

3. Методы микробиологической диагностики клещевого энцефалита: вирусологический и иммунологические. Диагностические биопрепараты.

4. Специфическая профилактика и терапия клещевого энцефалита: биопрепараты, их действующее начало, механизм действия.

5. Рабдовирусы, классификация, общая характеристика, распространение в природе.

6. Бешенство как зоонозная инфекция, эпидемиология и патогенез бешенства. Методы микробиологической диагностики: вирусоскопический, вирусологический, иммунологические, биологический.

7. Специфическая профилактика бешенства: антирабические вакцины типа Ферми и культуральная. История создания вакцины против бешенства Пастером, фиксированный и уличный вирус бешенства. Механизм действия вакцин.

8. Антирабический гамма-глобулин. Получение, показания к применению.

9. Семейство герпесвирусов, их классификация, патогенные для человека виды, общая характеристика, патогенез и эпидемиология герпесвирусной инфекции, методы микробиологической диагностики, специфическая профилактика герпетической инфекции.

Практическая работа

Задание № 1

У трех больных А., В., С. при подозрении на клещевой энцефалит в острый период инфекции на исследование взяли кровь, ею заразили мышей в мозг. Спустя 4 дня с мозгом заболевших мышей поставили реакцию гемагглютинации, которая оказалась положительной. После этого с мозгом мыши и сыворотками против клещевого энцефалита поставлена РСК. Учесть реакцию.

Какой использован метод диагностики?

Что искали в реакции гемагглютинации?

С какой целью поставлена РСК?

О чем говорят результаты РСК?

Сделайте заключение и оформите протокол.

Задание № 2

У больных М. и К., с подозрением на клещевой энцефалит выделить возбудителя не удалось. С сыворотками, взятыми у больных на 4 и 12 день болезни поставлена РСК. Оцените результаты реакции, сделайте выводы.

Какой использован метод диагностики?

Что выявляли в сыворотках больных в РСК?

Зачем исследовали парные сыворотки больных?

Можно ли на основании полученных результатов подтвердить диагноз?

Задание № 3.

У больных Л. и С., с подозрением на клещевой энцефалит на 13 день болезни взяты на исследование сыворотки и проведен ИФА по схеме:

1) антиген вируса клещевого энцефалита в лунке;

2) сыворотка больного;

3) антиглобулин М к человеческому белку, меченный пероксидазой хрена;

4) субстрат для пероксидазы, дающий при разложении желто-коричневое окрашивание.

Оцените результаты реакции, сделайте выводы. Диагностический титр- больше 1:1000.

Какой применен метод диагностики?

Что определяли в сыворотках больных?

Какова роль иммуноглобулина М?

Можно ли на основании полученных результатов подтвердить диагноз?