Указания к самостоятельной работе

1. Определение лецитиназной активности стафилококков следует производить массивный посев исследуемого материала на чашки с ЖСА, а инкубацию вести в течение 2 суток при 35—37° С. Непосредственно при просмотре чашек вокруг колоний отмечается образование радужных венчиков и мутной зоны — лецитовителлазная реакция. Чтобы избежать ошибок в определении желточной реакции, необходимо иметь в виду, что иногда наблюдается помутнение среды без радужного ободка, в этом случае проба на лецитовителлазу считается отрицательной.

2. Определение плазмокоагулазной активности. Производят посев культуры стафилококка в цитратную плазму (кроличью или человека). Пробирки ставят в термостат на 2 часа. При наличии фермента плазмокоагулазы происходит свертывание плазмы с образованием сгустка фибрина. Наличие фермента плазмокоагулазы является ажным идентификационным признаком патогенного стафилококка.

3. Определение ферментации маннита в анаэробных условиях технически очень просто и осуществляется путем посева уколом исследуемых культур в пробирки с высоким столбиком полужидкого агара Хоттнгера, содержащего 1% маннита и 0,004% индикатора бромкрезолпурпура или бромтимолблау (рН == 7,2) . Эту среду перед посевом “регенерируют”, т.е. кипятят в водяной бане, быстро охлаждают, а после посева заливают слоем стерильного вазелинового масла. Посевы инкубируют при 37 °С в течение 5 дней. Однако в значительном числе случаев результаты могут быть учтены уже через сутки.

4. Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам с применением бумажных дисков. В современный период резко возросла циркуляция микроорганизмов с приобретенной устойчивостью к антибиотикам, что предполагает необходимость определения чувствительности к антибиотикам каждого конкретного возбудителя инфекции. Исследованию на чувствительность к антибиотикам должен подвергаться материал в чистой культуре, так как при определении чувствительности в смешанной культуре можно получить ложные результаты вследствие микробного антогонизма и разной скорости роста микроорганизмов. На поверхность питательной среды АГВ (выпускаемой НИИПС г. Махачкала) наносят испытуемую бактериальную взвесь в количестве 1 мл. Плотность суспензии должна соответствовать стандарту мутности № 10 ГИСК им. Л.А.Тарасевича. Взвесь равномерно распределяют по чашке, остаток жидкости отсасывают пастеровской пипеткой. Чашки подсушивают при комнатной температуре 30-40 мин, после чего на поверхность чашки с помощью пинцета помещают диски с антибиотиками. Диски с антибиотиками накладывают пинцетом на равном расстоянии друг от друга и на 2 см от края чашки. На одну чашку помещают 6-8 дисков. Чашки ставят в термостат вверх дном и инкубируют при 37 С в течение 18-20 ч. Для учета результатов чашки помещают кверху дном на темную матовую поверхность и освещают настольной лампой под углом 45. С помощью линейки измеряют диаметры зон задержки роста вокруг дисков, включая диаметр дисков. Не следует обращать внимания на очень мелкие колонии в пределах зоны торможения роста.

5. Бактериоскопический метод диагностики острой гонореи. Из исследуемого материала делают два мазка, один окрашивают по Граму, другой метиленовым синим. При наличии в мазке гонококков видны грамнегативные диплококки, расположенные внутри лейкоцитов (незавершенный фагоцитоз).

Таблица 15