Самостоятельная работа студентов

1. Составить схему реакции Видаля.

2. Поставить реакцию агглютинации Видаля для диагностики брюшного тифа и паратифов.

3. Произвести учет реакции Видаля по демонстрационному материалу, дать заключение.

4. Поставить РПГА (РНГА) – реакцию пассивной (непрямой) гемагглютинации с эритроцитарным диагностикумом.

5. Произвести учет РПГА, дать заключение.

Указания к самостоятельной работе

Для постановки реакции Видаля берут кровь из пальца разовой иглой или из локтевой вены в количестве не менее 1-1,5 мл в начале второй недели заболевания. Кровь собирают в стерильную пробирку, которую помещают в термостат на 30-60 минут. Сгусток отделяют от стенок пробирки пастеровской пипеткой, пробирку помещают в холодильник. После отстаивания сыворотку отсасывают и используют для постановки реакции.

Исследуемую сыворотку разводят стерильным физиологическим раствором от 1:50 до 1:800. В реакции используют 2 контроля: в первом контроле – контроль антигена (КА) содержится физиологический раствор (1 мл) и диагностикум (2 капли); второй контроль – контроль сыворотки (КС) содержит 1 мл исследуемой сыворотки в разведении 1:50. Контроль должен быть абсолютно прозрачным.

Таблица 5

Схема постановки реакции Видаля

Разведения сыворотки Ингредиенты	1:100	1:200	1:400	1:800	КА	КС
1.Физ. раствор	1	1	1	1	1	-
2.Сыворотка больного 1:50	1	1	1	1	-	1
3. Диагностикумы:
Брюшного тифа с О-антигеном	2к	2к	2к	2к	2к	-
Брюшного тифа с Н-антигеном	2к	2к	2к	2к	2к	-
Паратифа А с О-и Н-антигенами	2к	2к	2к	2к	2к	-
Паратифа В с О- и Н антиге­нами	2к	2к	2к	2к	2к
в дез/ раствор
Поместить в термостат на сутки при t-37°.
Результаты:	++++	++++	+++	-	-	-

После добавления диагностикумов пробирки встряхивают и помещают в термостат на сутки при температуре 37°С.

Реакция оценивается по их +: ++++ – резко положительная, +++ – положительная, ++ – сомнительная, – отрицательная.

Высота титра агглютининов не может быть доказательством наличия заболевания. Достоверные результаты реакции агглютинации достигаются при повторных испытаниях сыворотки крови с интервалами 5-7 дней. Отчетливое нарастание титра агглютининов говорит о наличии инфекции.

Для выявления бактерионосителей реконвалесцентов используют реакцию пассивной Vi-гемагглютинации, с помощью которой определяют Vi-антитела в сыворотке крови. В качестве антигена используют эритроцитарный Vi-диагностикум, представляющий собой взвесь эритроцитов человека I (0) группы, обработанных формалином и сенсибилизированных Vi-антигеном брюшнотифозных бактерий.

Из пальца берут 1 мл крови. Перед постановкой реакции исследуемые сыворотки нагревают при температуре 56° 30 минут для разрушения групповых агглютининов.

Таблица 6

Схема реакции пассивной гемагглютинации

№	Ингредиенты	Разведения сыворотки
		1:10	1:20	1:40	1:80	1:160	Конт- роль
1	Сыворотка больного	0,5	0,5	0,5	0,5	дез. р-р
2	Физиологический раствор	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5
3	Эритроцитарный диагностикум	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5

В термостате при температуре 37°С на 2 часа.

Учет результатов:

Примечание: титр гемагглютининов в сыворотке 1:80.

Реакцию ставят в агглютинационных пробирках или в полистироловых пластинах с лунками. Сыворотку разводят от 1:10 до 1:160 – 1:320. Эритроцитарный диагностикум необходимо тщательно взболтать и добавлять в каждую лунку по 0,5 мл. Пробирки и луночки помещают в термостат на полтора-два часа при температуре 37°. Учет реакции проводят не ранее момента осаждения эритроцитов в контрольных пробирках (через 2 часа) и вторично через 24 часа стояния при комнатной температуре.

Контролями служат:

1. Постановка реакции с адсорбированной монорецепторной Vi-сывороткой. Реакция должна быть положительной до предельного титра сыворотки, указанного на этикетке ампулы.

2. Постановка реакции с О-сывороткой и физиологическим раствором. Результаты должны быть отрицательными.

Положительная реакция гемагглютинации характеризуется осадком эритроцитов на дне луночки или пробирки в виде «зонтика» с зазубренными концами. При отрицательной реакции, как и в контролях, эритроциты оседают компактно и осадок имеет вид диска с ровными краями и гладкой поверхностью («пуговки»)(табл.6). Диагностическое значение имеет титр пассивной Vi-гемагглютинации с 1:40 и выше.