Самостоятельная работа
Изучить режим в лабораториях особо опасных инфекций. Ознакомиться с противочумным халатом (костюмом).
Изучить схему лабораторной диагностики чумы.
Изучить культуральные свойства возбудителя чумы.
Промикроскопировать и зарисовать готовые мазки из чистой культуры палочки чумы.
Изучить препараты, применяемые для специфической профилактики и лечения чумы.
Изучить схему микробиологической диагностики туляремии.
Промикроскопировать готовые препараты из чистой культуры туляремийных бактерий, зарисовать.
Изучить препараты, применяемые для специфической профилактики и лечения туляремии.
Указания к самостоятельной работе Микробиологическая диагностика чумы
Бактериоскопический метод диагностики. Предварительный диагноз устанавливают на основании микроскопического исследования материала. При наличии в окрашенных мазках грамотрицательных биполярно окрашенных овоидных бактерий диагноз чумы весьма вероятен. Однако необходимо дальнейшее исследование для точного определения вида микроба. Точная диагностика требует выделения чистой культуры и постановки биологической пробы.
Бактериологическое исследование: посевы исследуемого материала производят на агар добавлением стимуляторов роста (кровь, сульфит натрия).
В термостате при 25-28º С уже через 10-12 часов могут обнаружиться колонии чумной палочки в виде характерных «кружевных платочков». Из типичных колоний делают пересев в пробирку с агаром и на чашку – газоном, куда после подсыхания наносят каплю чумного бактериофага. Определят полученную культуру по характеру роста, микроскопией мазков, реакцией агглютинации со специфической сывороткой, специфическим лизисом бактериофагом («стерильное пятно»).
Биологический метод. Для заражения животных используют морских свинок и лишь при отсутствии их – крыс и мышей. Обязательным является заражение втиранием и подкожно. Внутрибрюшинное заражение ускоряет диагностику, но оно применимо только тогда, когда материал не загрязнен посторонней микрофлорой. О чумной инфекции свидетельствуют следующие патологоанатомические изменения: множественные кровоизлияния на слизистой и серозной оболочках, воспаление лимфатических узлов, наличие некротических очагов в селезенке, реже в печени. В мазках из внутренних органов, крови, экссудата обнаруживают большое количество грамотрицательных, биполярно окрашенных бактерий.
Методы ускоренной диагностики чумы
Метод ускоренного обнаружения возбудителя чумы с помощью бактериофага, внесенного в исследуемый материал
Внесение бактериофага в исследуемый материал в момент его посева на агар с генцианвиолетом позволяет обнаружить под микроскопом негативные колонии фага или дорожку в первые часы, когда рост бактерий еще почти не заметен (через 2,5-3 часа). Метод прост, доступен и дает хорошие результаты при высокой концентрации чумного микроба и при относительно большом содержании посторонних микроорганизмов.
Определение нарастания титра чумного бактериофага, вносимого в исследуемый материал, где в случае наличия возбудителя фаг начинает размножаться уже через 30-40 минут. Материал сначала подращивают на средах, затем прибавляют генцианфиолетовый (1 мл 0,1 %-ный водно-спиртовой раствор на 100 мл среды) для подавления посторонней микрофлоры, а затем добавляют в пробирки разные концентрации фага.
Для ускоренной диагностики чумы большое внимание заслуживает люминесцентно-серологический метод, с помощью которого можно обнаружить возбудитель чумы в воздухе, воде, пищевых продуктах.
Серологическое исследование
Серодиагностика проводится с целью ретроспективной диагностики, а также при эпизоотических обследованиях в природных очагах чумы. Проводят РНГА с эритроцитами, на которых адсорбирован капсульный антиген возбудителя чумы. Ставят также реакцию нейтрализации антигена, ИФА и непрямую модификацию РИФ. При исследовании сывороток больных или павших грызунов в РНГА результат считается положительным при титре 1:40 и выше.