Самостоятельная работа студентов

1. Учесть результаты определения чувствительности к антибиотикам. Дать заключение к протоколу бактериологического исследования гноя.

2. Изучить (разобрать) схемы микробиологической диагностики газовой гангрены, столбняка.

3. Промикроскопировать мазок, приготовленный из отделяемого раны больного с подозрением на газовую гангрену. Окраска по Граму. Зарисовать в тетради.

4. Учесть результаты ускоренного метода обнаружения C. perfringens.

5. Выделеление чистой культуры анаэробов по способу Вейнберга- Перетца.

6. Реакция нейтрализации экзотоксина при ботулизме на белых мышах.

7. Заполнить протокол, дать заключение.

8. Изучить препараты для специфической терапии и профилактики анаэробных инфекций.

Указания к самостоятельной работе

1. Из отделяемого раны готовится мазок, окрашенный по Граму.

В мазке определяются крупные грамположительные палочки (сине- фиолетового цвета), лейкоциты. Обратить внимание на характер расположения спор.

2. Ускоренный метод обнаружения C. perfringens заключается в посеве исследуемого материала(раневого отделяемого) в две пробирки со средой Китта- Тароцци, в две пробирки с молоком, и две пробирки со средой Вильсон- Блера. Одна пробирка каждой среды после внесения материала прогревается при 80°С в течение 20 мин. Для C. perfringens характерно: почернение среды Вильсон- Блера в течение 3-х часов и бурное створаживание молока в течение 6 часов.

3. Выделение чистой культуры анаэробов по способу Вейнберга- Перетца. Берут пробирку со средой Китта-Тароцци с предполагаемым ростом анаэробов и пастеровской пипеткой с запаянным концом материал переносят через 3 пробирки с физиологическим раствором. Затем эту же пипетку вносят в две пробирки с сахарным агаром, затем в пробирку со средой Вильсон- Блера. Следует отметить, что все эти пробирки со средами предварительно следует растопить на водяной бане и затем остудить до температуры 40-45°С. Затем содержимое из пробирки со средой Вильсон- Блера выливают в стерильную чашку Петри, а сверху закрывают дном, так чтобы излишек агара выступал за края чашки. Затем чашку со средой Вильсона- Блера помещают в термостат на 2 – 3 суток. Наличие колоний черного цвета свидетельствует о чистой культуре анаэробов.

4. Реакция нейтрализации для обнаружения ботулинического токсина и его типа. Для обнаружения токсина двум белым мышам вводят исследуемый фильтрат в количестве 0,5 мл внутрибрюшинно, другим двум мышам 0,5 мл фильтрата и 0,2 мл смеси диагностических моновалентных сывороток типа А, В, С, Е. Перед введением смесь исследуемого материала и сывороток выдерживают при комнатной температуре в течение 30 минут. Наблюдение за животными ведут в течении 4 суток. При наличии токсина погибают первые две мыши, остальные остаются живы.

Для определения типа токсина в 5 пробирок разливают по 2,4 мл исследуемого фильтрата и по 0,6 мл сыворотки. В первую пробирку типа А, во вторую- типа В, в третью- типа С, в четвертую- типа Е.

В пятую пробирку – 0,6 мл физиологического раствора(контроль). Смесь после 30- минутного выдерживания при комнатной температуре вводят внутрибрюшинно по 1 мл двум мышам из каждой пробирки отдельными шприцами. Наблюдают 4 суток. При наличии токсина выживают мыши, получившие смесь токсина и гомологичной сыворотки, остальные мыши погибнут.

Например, выжили мыши, которым вводили смесь из 1-й пробирки, остальные мыши погибли.

Следовательно, в исследуемом материале обнаружен ботулинический токсин типа А.

Таблица 16