Самостоятельная работа

1. Разобрать схему микробиологической диагностики бруцеллеза.

2. Поставить реакцию Хеддльсона. Дать заключение.

3. Поставить реакцию Райта. Учет готовых результатов. Дать заключение.

4. Ознакомить студентов с профилактическими и лечебными препаратами, применяемыми при бруцеллезе.

5. Изучить схему микробиологической диагностики сибирской язвы.

6. Поставить реакцию Асколи с готовым фильтратом из шерсти (преципитиногеном) и преципитирующей сывороткой. Дать заключение.

7. Изучить препараты, применяемые для специфической профилактики и лечения сибирской язвы.

Указания к самостоятельной работе Микробиологическая диагностика бруцеллеза

Бактериологический метод

Бактериологическое исследование с целью выделения чистой культуры проводят в специальных лабораториях с соблюдением правил техники безопасности.

Посев крови для выделения гемокультуры проводят в первые дни болезни при наличии лихорадки. При этом 10 мл стерильно взятой из вены крови засевают в 2 флакона со 100-200 мл жидкой питательной среды (сахарного, печеночного или асцитического бульона).

В одном из флаконов создают повышенную концентрацию СО₂-10% (помещают в эксикатор со свечой для стимуляции роста B.aborus.

Учитывая медленный рост бруцелл, посевы выдерживают в термостате до 1 мес.

Бруцеллы на бульоне дают общее помутнение с последующим образованием слизистого осадка на дне, на агаре – гладкие, круглые мутноватые колонии.

Биологический метод

Для биопробы используют белых мышей и морских свинок. Животных заражают кровью внутрибрюшинно; осадком мочи и молока – подкожно. Через 20-30 дней у зараженного животного берут кровь и ставят с ней реакцию агглютинацию. Затем животных забивают, вскрывают и делают посевы крови из сердца, внутренних органов и лимфатических узлов. Выделенные чистые культуры бруцелл дифференцируют по способности роста в отсутствие повышенной концентрации углекислого газа, выделению сероводорода, чувствительности к бруцеллезному фагу и бактериостатическому действию анилиновых красителей (фуксина и тионина).

Серологический метод

Реакция агглютинации Райта.

Реакция агглютинации – один из основных диагностических методов при бруцеллезе.

Она обладает высокой специфичностью, появляется с первых дней болезни и остается положительной долгое время после заболеваний.

Для реакции Райта берут 2-3 мл крови шприцем из вены или пастеровской пипеткой из пальца.

Из крови получают сыворотку, первое разведение которой готовят путем смешивания 0,1 мл сыворотки с 2,4 мл физ.раствора.

Затем сыворотку в разведениях 1:25, 1:50, 1:100, 1:200, 1:400 разливают по 0.5 мл в пробирки, куда затем добавляют по 0.5 мл антигена.

Таким образом, степень разведения удваивается и реакция идет в разведениях 1:50, 1:100, 1:200, 1:400, 1:800. В качестве антигена употребляют готовый диагностикум (взвесь убитой культуры бруцелл), который перед употреблением разводят таким образом, чтобы в 1 мл содержалось 2 млрд бруцелл.

Реакция агглютинации ставится с двумя контролями: 1) испытуемая сыворотка в разведении 1:25 в физ.растворе для исключения спонтанного образования хлопьев в сыворотке (кс); 2) антиген + физиологический раствор для исключения спонтанной агглютинации антигена (ка).

Пробирки ставят в термостат при t 37⁰ на 20-24 часа, после чего учитывают результаты.

Таблица 20

Схема постановки реакции Райта

Пробирки	1	2	3	4	5	6	7
Компоненты
1.Физиологический раствор	_	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5
2.Сыворотка больного (1:25)	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	_	0,5
3.Диагностикум Райта	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	_
4. Конечное разведение	1:50	1:100	1:200	1:400	1:800	_	_
5.Учет результатов	++++	+++	+++	++	-	-	-

Реакция Хеддльсона

На стеклянную пластинку наносят сыворотку больного в количестве 0,08 – 0,04 – 0,02 – 0,01 – 0,02 мл и добавляют в нее 0,03 мл антигена, а в последнюю порцию сыворотки – 0,03 мл физ.раствора (контроль сыворотки); 0,03 мл антигена + 0,03 мл физ.раствора, (контроль антигена после чего капли смешивают и нагревают над пламенем в течение 2 минут, после чего при положительном результате быстро наступает агглютинация. Результат считается положительным при наличии агглютинации во всех четырех дозах сывороток.

Таблица 21

Схема постановки реакции Хеддльсона

Пробирки Компоненты	1	2	3	4	Контроль
					сыворотка	антиген
1. Физиологический раствор	_	_			0,03	0,03
2.Сыворотка больного	0,08	0,04	0,02	0,01	0,02	_
3. Диагностикум Райта	0,03	0,03	0,03	0,03	_	0,03

Аллергический метод применяют для выявления ГЗТ к бруцеллам, наблюдающейся у больных бруцеллезом, инфицированных бруцеллами лиц и привитых живой бруцеллезной вакциной. Ее ставят с 15-20 дня болезни. Аллергическая реакция бывает положительной в течение многих лет после перенесенного заболевания и у привитых.

Внутрикожная аллергическая проба Бюрне (методика постановки).

В среднюю часть сгибательной поверхности предплечья вводят строго внутрикожно 0,1 мл бруцеллина (прозрачный фильтрат из 3-4 недельных бульонных культур бруцелл трех типов). Реакция считается положительной, если через сутки на месте введения антигена появятся краснота и болезненный отек размером 4×6 см и выше.