Микробиологическая диагностика

Материалом для исследования служат смыв из носоглотки, кровь. Методы исследования:

- вирусологический - из исследуемого материала вирус выделяют при заражении куриного эмбриона и культур тканей с последующей индикацией и идентификацией в РГА, РТГА или РСК;

- иммуноиндикация - обнаружение антигена вируса в носоглоточных, бронхиальных смывах с помощью РТГА, ИФА или РИФ, которые применяются для экспресс-диагностики гриппа;

- серологический - определяют антитела в сыворотке крови больных начиная со второй недели, используют - РТГА, РСК, ИФА с парными сыворотками. С помощью ИФА определяют и титр секреторных Ig А в носоглоточных смывах.

Самостоятельная работа студентов.

1. Изучить и зарисовать схему микробиологической диагностики ОРВИ.

2. Зарисовать и поставить РГА для индикации вируса.

3. Изучить схему постановки РТГА для идентификации выделенного вируса. Учесть результаты, дать заключение.

Указания к самостоятельной работе

1. Схема микробиологической диагностики ОРВИ (таблица).

2. Техника постановки РГА (реакции гемагглютинации).

   

1-опыт

2-контроль

Рис. 5. Реакция гемагглютинации

Реакцию гемагглютинации ставят на стекле (по типу ориентировочной реакции агглютинации), в пластмассовых планшетках с лунками или в пробирках.

При положительной реакции в опытной капле происходит склеивание эритроцитов. В контроле склеивание эритроцитов на происходит. К капле аллантоисной жидкости, содержащей вирус гриппа, прибавляют каплю 5%-ной взвеси куриных эритроцитов. В контроле вместо аллантоисной жидкости используют физиологический раствор.

3.Реакция торможения гемагглютинации (РТГА)

РТГА может быть использована для определения типа вируса и титра антител (см. рис 6). Для определения типа вируса на предметное стекло наносят по одной капле вирусосодержащего материала – аллантоисной жидкости (количество капель должно соответствовать количеству сывороток). В приготовленные капли последовательно вносят по одной капле типовых сывороток – А, А₁, А₂, В, С. Контролем служит физиологический раствор и нормальная сыворотка. Затем в каждую каплю вносят по одной капле 5% - ной взвеси эритроцитов. Результат регистрируют через 5 минут. При соответствии вируса типу сыворотки антитела связывают гемагглютинин вируса, и гемагглютинация не наступает (РТГА положительная).

Рис.6.Схема РТГА для определения типа вируса гриппа

Эта реакция может быть поставлена и в пробирках с целью титрования вируса или антител.

Таблица№32

Препараты для специфической профилактики гриппа

Наименование	Состав	Показания
1. Живая вакцина интраназальная, подкожная 2.Убитая цельно-вирионная интраназальная, парентеральная 3.Химическая вакцина 4.Субъединичная вакцина «Ваксигрипп»-(Франция) «Инфлювак»-(Голландия) «Агриппал» «Гриппол» Противогриппозный донорский иммуноглобулин	живой аттенуированный вирус гриппа А убитый вирус гриппа А субвирионная вакцина из расщепленных вирионов вакцина, содержащая только гемагглютинин и нейраминидазу сплит-вакцина гриппозная субъединичная субъединичная трехвалентная, субъединичная готовые антитела	по эпидпоказаниям по эпидпоказаниям по эпидпоказаниям ежегодно, однократно по эпидпоказаниям ежегодно, однократно по эпидпоказаниям ежегодно, однократно по эпидпоказаниям ежегодно, однократно по эпидпоказаниям ежегодно, однократно по эпидпоказаниям при тяжелых формах заболевания

Примечание: курсивом выделены более используемые препараты