Лабораторно-практическое занятие № 2 определение кмафАнМ, количества термофильных микроорганизмов изучение спмо – колиформных бактерий.
Ц е л ь з а н я т и я:. Освоить методику определения КМАФАнМ, количества термофильных микроорганизмов. Изучить биологические свойства СПМО - бактерий группы кишечной палочки (колиформных бактерий).
Задание 1. Освоить методику определения общего числа микроорганизмов (КМАФАнМ) бактериологическим методом. С этой целью сделать серийные разведения из пробы почвы и молока. Произвести первичный посев из полученных разведений методом глубинного и поверхностного посева на МПА.
Основные этапы определения омч (кмафАнМ) бактериологическим методом:
1.Гомогенизация 2.Десорбция 3. Приготовление разведений
___
___
_____ _____ ____ ____ ____
4.Глубинный посев: по ______cм3
4.Поверхностный посев: по______см3
5.Культивирование при _______________________________________________________
6.Подсчёт колоний __________________________________________________________
Задание 2. Провести определение КМАФАнМ в исследуемом материале, используя имеющиеся, заранее подготовленные чашки Петри с ростом на (в) МПА колоний микроорганизмов.
Пример расчета:
Дано: В одной чашке при глубинном посеве 1 см3 исследуемой пробы воды в разведении 1:10 выросло 53 колонии, в другой чашке при посеве этой же воды в разведении 1:100 выросло 6 колоний.
Определить: КМАФАнМ в пробе воды.
Расчет: В 1 см3 воды содержится: 53 х 10 + 6 х 100 / 2 = 565 микробных клеток. Округляем до 560. Таким образом, в данном случае КМАФАнМ – 560 КОЕ или 5,6 х 102 КОЕ.
Если выросло большое количество колоний, можно сделать подсчёт, разделив чашку на сектора. Если на одной из двух чашек подсчет колоний невозможен, то учитывают колонии, выросшие на одной чашке. Если из-за сплошного роста невозможен подсчет колоний на обеих чашках, то в протоколе анализа следует писать: «сплошной рост».
Дано: на чашке Петри с МПА выросло « » колоний микроорганизмов.
Определить: КМАФАНМ в исходной пробе исследуемого материала.
Результат:_______________________________________________________
Изучение биологических свойств спмо - колиформных бактерий
Задание 3. Индикатором какого загрязнения являются колиформные бактерии? _________________________E.coli?______________________________
Задание 4. Дать определение понятиям:
ОКБ: ____________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
ТКБ:_____________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
Коли-титр:_____________________________________________________________________
Коли-индекс:____________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
Задание 5. Изучить морфологические свойства чистой культуры БГКП в мазках, окрашенных по Граму. Сделать рисунок микроскопической картины.
1111111111 E.coli
______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
З
адание
6.
Изучить и зарисовать характер изменений
на жидкой среде накопления при росте
колиформных бактерий:
Среда Среда Кесслер: КОДА:
Задание 6. Сделать пересевы из чистой культуры Е. coli на среду Эндо.
Задание 7. Составить схему выявления ОКБ, ТКБ и E.coli при санитарно-микробиологических исследованиях:
№ |
Схема выявления колиформных бактерий и E.coli при санитарно-микробиологических исследованиях |
1.
2.
3.
4.
5. |
Первичный посев в жидкую среду накопления: _____________________________________________________________ _____________________________________________________________ _____________________________________________________________ _____________________________________________________________ _____________________________________________________________ Пересев на селективную агаризованную среду для энтеробактерий: _____________________________________________________________ _____________________________________________________________ _____________________________________________________________ _____________________________________________________________ Подтверждение принадлежности к ОКБ: ______________________________________________________________ _____________________________________________________________ При необходимости – дифференциация ОКБ и ТКБ: _____________________________________________________________ _____________________________________________________________ _____________________________________________________________ При необходимости – дифференциация E.coli по биохимическим тестам: ______________________________________________________________ _____________________________________________________________ _____________________________________________________________ _____________________________________________________________ _____________________________________________________________ _____________________________________________________________ _____________________________________________________________
|
З
адание
7.
Изучить биохимические тесты, применяемые
для дифференциации E.coli
и других колиформных бактерий. Зарисовать
результаты тестирования.
E.coli:
Индол+ метил-рот+ ацетоин-- цитрат-- - рост на 3-х сахарном агаре
Задание 8. Изучить колонии БГКП на различных плотных элективных средах. Дать характеристику колоний на каждой среде, заполнив таблицу: