5.1.2. Приготування та стерилізація розчину 2

В колбу об’ємом 1 л вносять 500 мл води очищеної i розчиняють 30 г дріжджів та 15 г глюкози. Перемішують, помiщають в автоклав. Стерилізують 30хв. при температурі 112°С та тиску 0,11 МПа.

5.2.3. Приготування та стерилізація розчину 3.

В колбу об’ємом 1л вносять 500мл води очищеної i розчиняють 15 г сульфат амонію, 49 г дигідроортофосфат калію, 39 г гідрофосфат натрію, 9 г хлорид магнію, 0,9 г хлорид кальцію. Перемішують, помiщають в автоклав. Стерилізують 40 хв при температурі 130°С та тиску 0.15 МПа.

Після стерилізації у ємність місткістю 3 л в асептичних умовах зливають розчин 1, розчин 2 і розчин 3 перемішують.

ДР 5.2 Підготовка та стерилізація поживнго середовища для виробничої ферментації

Для приготування розчину для виробничої ферментації, об’ємом 30 л зважують і змішують такі кількості компонентів:

Розчин 1:

Соя – 300;

Розчин 2:

дріжджі – 300;

глюкоза – 150.

Розчин 3:

Сульфат амонію – 150;

Фосфат колію – 390;

Гідрофосфат натрію - 390;

Хлорид магнію – 90;

Хлорид кальцію – 9.

ДР 5.2.1 Підготовка і стерилізація розчину 1

300 г сої зважуємо на електронних вагах, промити, подрібнити, помістити в збірник (З-24) об’ємом 10 л залити 4 л очищеної води і кип'ятити протягом 1,5–2 год. Відвар профільтрувати.

Стерилізувати при температурі 112°С протягом 30 хв та тиску 0,15 МПа.

5.2.2. Приготування та стерилізація розчину 2

У збірник (З-25) 10 л змішують 300 г дріжджів, 150 г глюкози. Доводять об’єм водою водопровідною до позначки 5 л, перемішують і стерилізують при температурі (110±2)ºС, протягом 30 хв.

ДР 6.2.3 Підготовка і стерилізація розчину 3

У ферментері (Ф-26) змішують 150 г сульфат амонію, 390 г дигідроортофосфат калію, 390 г гідрофосфат натрію, 90 г хлорид магнію, 9 г хлорид кальцію. Додають воду водопровідну до 10 л і стерилізують при температурі 131ºС протягом 1 год. Після стерилізації розчини до розчину 3 подають розчин 1 та розчин 2.

ДР 6. Приготування компонентів захисного середовища

ДР 6.1. Приготування та стерилізація розчину желатини

1,575 кг желатини зважують на вагах (КП-27) і переносять у збірник (Зб-28) загальним об'ємом 30 л, куди заливають 17,5 л води очищеної. Залишають набрякати при кімнатній натній температурі на 3 години.

Потім нагрівають до температурою 50-60 °С для повного розчинення желатини. Отриманий розчин желатини фільтрують через фільтр.

Стерилізація відбувається шляхом автоклавування при температурі 121 °С на протязі 15 хвилин.

Отриманий розчин передають на операцію «Приготування сахарозо-желатинового середовища»

ДР 6.2. Приготування розчину сахарози

15,75 кг сахарози зважують на вагах (КП-27) і переносять у збірник (Зб-29) загальним об’ємом 100л, куди наливають 52,5 л води очищеної, що має температуру 60-80 °С. Вміст збірника ретельно перемішують до повного розчинення сахарози. Отриманий розчин передають на операцію «Приготування сахарозо-желатинового середовища».

ДР 6.3. Приготування сахарозо-желатинового середовища

Розчин желатину від ДР 5.1. і розчин сахарози від ДР 5.2 змішують в збірнику (Зб-30) загальним об’ємом 100 л стерилізують при температурі 110ºС, тиску 0,05 МПа протягом 30 хвилин.

По закінченню стерилізації проводять контроль сахарозо-желатинового середовища на стерильність. Посіви інкубують у термостаті при (38±1)ºС протягом 24 годин.

У контрольних посівах повинен бути відсутній ріст мікроорганізмів.

Стерильне сахарозо-желатинове середовище в збірнику безпосередньо після отримання результатів контролю, в об’ємі 70 л передають на операцію «Отримання виробничої культури».

ТП 7. Підготовка посівного матеріалу

ТП 7.1 Одержання посівного матеріалу І генерації

Для одержання культури І генерації використовують 15 флаконів (ампул) із ліофілізованим штамом E.coli M17, робочої посівної серії. Флакони розкривають і градуйованою піпеткою в асептичних умовах вносять 1 мл стерильного ізотонічного розчину хлориду натрію. Вміст флаконів струшують і за допомогою петлі пересівають у колбу, місткістю 200 мл з 150мл казеїнового бульйону, закривають ватно-марелевими пробками.

Колбу поміщають на качалку, підтримують температуру (37±1)°С. Посів витримують при зазначеній температурі протягом 70 - 72 годин.

ТП 7.2 Одержання посівного матеріалу ІІ генерації

Для одержання культури ІІ генерації. Вміст колби з І генерації переносять у колби зі 100 мл казеїнового бульйону. Закривають ватно-марлевими пробками і витримують в термостаті при температурі (37±1)°С. через 24 год виконують мікробіологічний контроль, а також визначають кількість живих клітин за методом Коха (має бути не нижче 10⁹ КУО/мл).

ТП 8. Виробничий біосинтез

ТП 8.1 Вирощування у ферментері

Виробничий біосинтез здійснюють на поживному у ферментері BioFlo*4500 (New Brunswick Sci), об’ємом 50 л з 30 л поживного середовища, за таких параметрів культивування: температура (38±1)ºС, рН 7,2 – 8,0, надлишковий тиск 0,03 – 0,04МПа, тривалість культивування 7-8год. Упродовж процесу біосинтезу періодично (кожні півгодини на 10 хв) вмикають перемішуючий пристрій (70 об/хв). Процес ведуть за постійної подачі стерильного повітря (0,3 м³/(м³·год)).

Через кожні 2 год відбирають проби культуральної рідини для проведення мікробіологічного контролю і визначення концентрації живих клітин. Процес культивування зупиняють після досягнення концентрації колібактерій на рівні 10⁹ КУО/мл.

ТП 9. Одержання напівфабрикату Колібактерину

ТП 9.1 Змішування біомаси з захисним середовищем висушування

У збірник (Зб-31) загальним об'ємом 100 л завантажують культуральну рідину від ТП 6.2, потім додається попередньо простерилізовані захисне сахарозо-желатинове середовище від ДР 6.1. і ДР 6.2.

10 %-м розчином NaОН регулюється рН 7,0-7.4, одержуючи напівфабрикат Колібактерину. На цій стадії обов'язково здійснюють мікробіологічний контроль напівфабрикату на відсутність сторонньої мікрофлори.

Залишки культури з ємності контролюють на відсутність сторонньої мікрофлори методом посіву по 0,05 мл або 0,01 мл на одну чашку Петрі з МПА.

Посіви на МПА інкубують в термостаті при температурі 38°С протягом 48 годин. Після закінчення інкубації на чашках Петрі повинен бути відсутній ріст сторонніх мікроорганізмів.

ТП 10. Ліофільне сушіння напівфабрикату Колібактерину

ТП 10.1. Заморожування напівфабрикату

Відмитий продукт поміщають у касети. Касети (К-32) з виробничою культурою, що надійшли, завантажують в установки глибокого заморожування (Х-33), заздалегідь знявши з них кришки. Колібактерин заморожують заа температури -60^оС упродовж 18-24 год.

ТП 10.2 Ліофільне висушування

По закінченню заморожування касети з замороженим препаратом негайно перевантажують в сушильну камеру установки ТГ-50 (ЛС-34).

Ліофільне сушіння замороженого препарату здійснюють під вакуумом (26,6 Па). Через 40 год після початку процесу сушіння починають плавне підігрівання плиць сублімаційної установки на 1-2^оС за годину до досягнення температури 0^оС, після чого збільшують підігрівання на 2-3 ^оС за годину до досягнення температури 32-34^оС. За цієї температури Колібактерин витримують приблизно 6 год. процес сушіння триває близько 80 год.

ТП 11. Подрібнення напівфабрикату Колібактерину

ТП 11.1. Подрібнення ліофілізованої маси

Подрібнення ліофілізованої маси здійснюють на вібраційній дробарці (ГФ-35), що подрібнює матеріал до необхідних розмірів (0,3 мм).

ПМВ 12. Пакування, маркування, відвантаження

ПМВ 12.1 Фасування препарату

Готовий порошок має вологість має вологість 4-7%. Якщо його вологість підвищиться до 8% і більше, то він згрудковується, втрачає товарний вигляд і ферментну активність. Тому його герметично пакують у етикетовані поліетиленові пакети для забезпечення вологонепроникності. Препарат фасують на дозувальному апараті (ДА) по 1 кг. Відбраковані поліетиленові пакети відправляють  на утилізацію. На упаковці указують назву продукту, назву(фірму) виробника, масу нетто, номер партії, активність, дату виготовлення та строк придатності. Також обов’язково вказується інструкція по використанню.

ПМВ 12.2. Фасування в ящики

1 упаковку  пакують в коробки з картону коробкового для споживчої тари за ГОСТ 7933-89Е, дану операцію здійснює апарат для фасування у коробки Па-42. В коробку укладають інструкцію з застосування, потім ці коробки обклеюють стрічкою на апараті для обклеюваня стрічкою Обо-43. В ящик фанерний посилковий пакує апарат для пакування у дерев’яні ящики Овп-44 згідно з ГОСТ 45-39-89 укладають 20 коробок упаковками та пакувальний лист.

ЗВ 13 Знешкодження відходів

До стадії подаються речовини та матеріали наступного походження:  складові миючих та дезінфікуючих розчинів, що застосовуються на стадії санітарної підготовки обладнання та приміщень;  компонентами вихідної сировини та напівпродуктів, що переробляються на стадіях. Апаратурне оформлення виробництва не забезпечує 100%-вого використання сировини, напівпродуктів, матеріалів. Наявні втрати їх обумовлюють утворення твердих та рідких промислових відходів.

ЗВ 13.1Знешкодження рідких відходів

Виробничі стоки  на ділянці виробництва готових лікарських препаратів утворюються на стадії санітарної підготовки та промивки обладнання та разом з загальнозаводськими стоками  скидаються в міську каналізацію. Вміст специфічних речовин в стічних водах обумовлений регламентними втратами та не перевищує значення санітарно-гігієнічних нормативів.

ЗВ 13.2Знешкодження твердих відходів

Тверді некондиційні відходи виробництва збираються та направляються на полігон твердих побутових відходів.