Методи контролю Колібактерину:

1. Опис

Порошок (кристалічна або пориста маса) жовтого кольору різної інтенсивності з специфічним запахом та смаком. Визначають візуально.

2. Автентичність

В мазках, пофарбованих по Граму - грамнегативні, короткі палички з закругленими кінцями. На середовищі МПА через (15±3) годин утворює круглі з рівними краями випуклі колонії, на середовищі № 4 утворює червоні колонії з металевим блиском.

3. Розчинність

При розчиненні препарату у воді Р з розрахунку 1 мл води на 1 дозу препарату при ретельному перемішуванні протягом 5 хв утвориться суміш жовтуватого кольору. Визначення проводять візуально.

4. Прозорість

Суміш має бути не прозорою. Розчин готують з п.3 «Розчинність». Визначають візуально.

5. Кольоровність

Суміш препарату повинна мати жовтуватий колір. Завись готують за п. З "Розчинність". Визначають візуально.

6. рН

6,8 - 7,2. Суміш готують за п.3 «Розчинність». Визначають згідно з ДФУ, вид. 1, р. 2.2.3, с. 17, потенціометрично.

7. Втрата в масі при висушуванні

Не більше 3.5 %. Визначають згідно з ДФУ, вид.1, р. 2.2.32, с 49.

0 1 г сухої розтертої в порошок біомаси із флакона сушать у вакуум-сушильній шафі при температурі від 58 °С до 62 °С і за тиску від 1.5 кПа до 2.5 кПа до постійної маси.

8. Мікробіологічна чистота

Препарат не повинен містити сторонньої мікрофлори.

Зразок лікарського засобу в кількості 10 г поміщають у мірний флакон місткістю 250 см³, доводять до 100 см³ (розведення 1:10) буферним розчином з хлоридом натрію і пептоном, рН 7,0 та перемішують до отримання суміші.

Для визначення загальної кількості бактерій по 1 см³ суміші висівають не менш як на дві чашки Петрі на поживне середовище №1 (МПА).

Для визначення загальної кількості грибів по 1см³ зависі висівають не менш ніж на дві чашки Петрі на поживне середовище №2 (Сабуро).

Посіви на середовищі №1 інкубують у термостаті при температурі 37 ^оС для виявлення бактерій, а посіви із середовищем №2 – за температури 20 – 25 ^оС для виявлення грибів протягом 5 діб.

Препарат не повинен містити сторонніх мікроорганізмів. У разі виявлення в посівах сторонніх мікроорганізмів контроль проводять на подвоєній кількості зразків препарату. За відсутності росту мікроорганізмів у разі повторного висіву досліджуваний препарат вважають таким, що відповідає вимогам. Якщо сторонні мікроорганізми ростуть за повторного висіву зразків, то серію препарату бракують.

9. Специфічна нешкідливість

Препарат має бути не шкідливим для білих мишей за введенням його перорально в кількості однієї дози.

Випробовування проодять на п’яти безпородних мишах різної статті масою 14-16 г (зважують мишей безпосередньо перед дослідом).

Вміст флакону розводять водою Р з розрахунку 0,5 см³ на одну дозу препарату. Кожній з п’яти мишей вводять 0,5 см³ отриманої суміші перорально в шлунок за допомогою насадки на шприц міткістю 1 см³. Термін спостереження – 5 діб.

Усі тварини мають залишатися живими і не втратити в масі.

У разі загибелі за цей період хоча б однієї тварини або втрати у масі контроль повторюють на подвійній кількості тварин. Препарат вважають нешкідливим, якщо при повторному випробовуванні не загинуло жодної з мишей. У протилежному випадку цю серію препарату бракують.

10.Специфічна активність препарату визначається за кількістю життєздатних клітин колі бактерій в одній дозі препарату.

В одній дозі препарату має міститися не менш як 10⁹ життєздатних клітин колі бактерій.

• Визначення кількості живих колібактерій в одній дозі препарату

Для визначення кількості життєздатних клітин E.coli M-17, який входить до складу пробіотику колібактерину, від кожної серії пробіотику досліджували не менше 3 зразків. В якості живильного середовища використовували середовище Ендо. З метою отримання росту клітин E.coli M-17 у вигляді окремих колоній сухий пробіотик кожної серії розчиняли стерильним 0,9 % водним розчином натрію хлориду окремими стерильними піпетками із розрахунку 1 доза препарату пробіотика в 1 мл розчину. Із основного розведення (10^-1) готували послідовні десятикратні розведення в стерильному 0,9 % водному розчині натрію хлориду в окремих стерильних пробірках окремими стерильними піпетками. При цьому останнє розведення було на порядок більшим, ніж розведення, яке містить вказану в інструкції кількість клітин E.coli M-17 в 1 дозі пробіотика. Із одержаних серійних розведень окремими стерильними піпетками, починаючи з найбільшого розведення, по 0,1 мл наносили на дві чашки Петрі з середовищем Ендо і ретельно розподіляли суспензію клітин кишкової палички по поверхні середовища стерильним шпателем. Посіви вміщували в термостат при 37⁰С, інкубували протягом 18-20 годин і враховували результати. При підрахунку кількості вирослих колоній E.coli M-17 враховували чашки Петрі, на яких виросло не менше 15 колоній. Отриману кількість колоній на двох чашках Петрі складали, ділили на 2, множили на відповідне розведення і таким чином визначали кількість життєздатних клітин. Кількість вирослих у трьох зразках препарату пробіотику колоній E.coli M-17 складали і для отримання середнього арифметичного показника ділили на 3. Множення кількості вирослих колоній E.coli M-17 здійснювали на ступінь розведення і на 10, так як посів на чашку Петрі був здійснений в об`ємі 0,1 мл.

11.Герметичність.

Після досягнення в камері установки для перевірки флаконів на герметичність атмосферного тиску здійснюють контроль флаконів на герметичність. Перевіряють наявність необхідного об’єму розчину метиленового синього 0,025%, його концентрацію і температуру в посудині.

Пакування. По 10 флаконів препарату та інструкцію з його використанням викладають у пачку за ГОСТ 64-071-89 з картону коробкового (хромерзац) за ГОСТ 7933-89 з перегородками або гафрованою вкладкою, або з полімерною вкладкою з плівки полівінілхлоридної для розміщення та фіксації флаконів.

На флакони наклеюють етикетку з етикеткового паперу за ГОСТ 7625-86 або паперу для письма за ГОСТ 18510-87, або етикетку на липкій основі.

Маркування. На флакон фарбою глибокого друку для скляних виробів за ТУ У 42.34.011-97 українською або російською мовою наносять: назву препарату, кількість доз, номер серії, термін придатності.

Транспортування. Препарат транспортують у закритих транспортних засобах усіма видами критого транспорту за температури 2 – 8 ^оС відповідно до ГОСТ 7768-90

Зберігання. В захищеному від світла місці при температурі не вище10 ° С. Зберігати в недоступному для дітей місці!

Термін придатності. 1 рік.