Методи контролю Визначення сторонньої мікрофлори

Чистоту культуральної рідини визначають посівом її на різноманітні середовища.

Присутність бактерій групи кишкових паличок визначають посівом культуральної рідини в пробірки з середовищем Кесслер, посіви термостатують при температурі при температурі 43-45 ^оС протягом 24 год. Відсутність газу у пробірках свідчить про те, що культуральна рідина не забруднена БГКП. Поява газоутворень свідчить про те можливе забруднення закваски цим видом бактерій. Для підтвердження наявності БКГП проводять посіви із пробірок де відмітили наявність газу на середовище Ендо малинових колоній з блиском відбирають мазки, фарбують за Грамом та мікроскопіюють. Наявність грам негативних паличок свідчить про присутність БКГП [19]. 

Визначення кількості життєздатних колібактерій

Кількість життєздатних кишкових паличок М17 в одній дозі препарату перевіряють паралельно з робочим стандартним зразком колібактерину. В 1 дозі РСЗ має бути не менше 6 млрд. живих бактерій Е. coli М17.

Визначення кількості живих бактерій кишкової палички М17 в 1 дозі препарату проводять на трьох зразках від кожної серії 10.

Вміст флакону розводять розчином 9 г/л натрію хлориду Р із розрахунку 1мл на 1 дозу препарату та залишають при кімнатній температурі на 1 годину для регідратації біомаси. РСЗ розводять згідно інструкції до застосування. Отримані зависі розводять в 30 раз (0.5 мл початкової суспензії в 14.5 мл розчині 9 г/л натрію хлориду Р) та вважають першим розведенням (10^-1). Із отриманих початкових розведень в пробірках готують ряд послідовних десятикратних розведень до 10" в розчині 9 г/л натрію хлориду Р, використовуючи для кожного розведення окрему піпетку. З розведень 10^-6 та 10^-7 висівають по 0.1 мл мікробної суспензії піпеткою місткістю 1 мл на дві чашки Петрі із середовищем № 4 (середовище Ендо). Після (19±1) годин інкубації при температурі (37±1)°С проводять підрахунок колоній, які виросли, та обчислюють вміст живих бактерій в одній дозі РСЗ та досліджуваного препарату. При підрахунку враховують чашки, на яких виросло не менше 10 колоній 10.

Вираховують кількість живих бактерій в одній дозі за формулою:

де: а - середня кількість колоній на чашку даного розведення (n);

n - розведення;

Кількість колоній множать на 3, оскільки попереднє розведення препарату було 1:30.

В першу чергу вираховують кількість живих М17 в РСЗ. Якщо вміст бактерій Е. соlі в одній дозі РСЗ складає не менше 6х10⁹ КУО, це свідчить про задовільні ростові властивості поживного середовища та достовірність результатів аналізу. Якщо кількість живих бактерій Е. соlі в одній дозі РСЗ менше 6х10⁹ КУО, то дослід необхідно повторити на іншій серії поживного середовища 10.

Якщо вміст живих бактерій Е. соlі М17 в одній дозі досліджуваного препарату менше, чим 6х10⁹ КУО, а протягом терміну зберігання - менше, ніж 4,5 КУО при цьому вміст живих бактерій в одній дозі РСЗ відповідає вимогам, тоді контроль необхідно повторити на подвоєній кількості зразків досліджуваного препарату.

Якщо при повторному контролі показники РСЗ відповідають пред'явленим вимогам, а показники досліджуваного препарату нижче, то серію препарату бракують 10.