Розділ 4. Обґрунтування вибору біологічного агента і його характеристика Обгрунтування вибору біологічного агента

Єдиним продуцентом пробіотичного препарату Колібактерину є Escherichia coli. Існує декілька штамів, які здатні синтезувати Колібактерин - E. coli M 17 та E. coli M 17/ p Colap.

Штам E. coli M 17/ p Colap відрізняється від штаму E. coli M 17 підвищеною антагоністичною активністю, щодо бактерій групи кишкової палички, також здатний синтезувати коліцин В та є нечутливим до дії антибіотиків 9.

Тому препарат на основі штаму E. coli M 17 не можуть бути ефективними під час антибіотикотерапії. Між тим одночасне застосування антибіотиків і пробіотиків може запобігати розвитку дисбактеріозу і тим самим підвищувати ефективність терапевтичних заходів та скорочувати терміни лікування9.

Для підвищення антагоністичної активності штаму Е. coli М17 і надання йому стійкості до ампіциліну був сконструйований новий штам Escherichia coli М17/pColap, що містить гібридну плазміду pColap. Плазміда pColap некон’югативна і немобілізована несуча гени продукції колицина Е1 і детермінант стійкості до ампіциліну в дозах до 150 мг/л (табл. 4.1) 9. Це дозволяє створити пробіотичний препарат з підвищеною антагоністичною активністю і резидентний на тлі антибіотикотерапії. Це полегшує отримання стандартного препарату на основі штаму і гарантує, що при прийомі препарату пацієнтом без супутньої антибіотикотерапії не відбудеться елімінація плазміди.

Таблиця 4.1. Ріст штаму E.coli M17 і його похідної, на середовищі з

Різним вмістом ампіцеліну

Досліджуваний штам	Концентрація ампіцеліну(мкг/мл)
	5	50	75	100	125	150	200
M17	+	-	-	-	-	-	-
M 17 fimH::kan/p Colap	+	+	+	+	+	+	-

П р и м і т к а . «+» - бактеріальний ріст; «-» - відсутність росту

Отже, вихідний штам кишкової палички М17 проявляє високу чутливість до ампіциліну. Водночас плазмида pColap, що міститься в штамі М17/pColap, забезпечує стійкість до концентрацій ампіциліну не вище 150 мг/л 9.

Характеристика біологічного агента

Рід Escherichia об’єднує симбіотичні та патогенні кишкові палички (Escherichia coli , Escherichia fergusonii, Escherichia. hermannii , Escherichia. vulneris , Escherichia. blattae).

Симбіотичні для людини E. сolі належать до резистентної групи кишкових паличок, які значно розділяються за ступенем антагоністичної активності. У кишечнику людини E. сolі з’являється у перші дні після народження та зберігається впродовж життя.

Кишкові палички в організмі людини виконують такі важливі функції: сприяють гідролізу лактози; беруть участь у продукуванні вітамінів групи В, К, фолієвої кислоти тощо. Виробляють бактеріоцини та мікроцини з відповідно високою та низькою молекулярною масою, що пригнічують ріст патогенних шигел, сальмонел, ентеропатогенних кишкових паличок та умовно патогенних мікроорганізмів різних таксономічних груп 10.

Морфолого-культуральні ознаки

Escherichia coli М17/рColap – грамнегативна бактерія, не утворює ендоспор. Клітини мають форму палички зі злегка заокругленими кінцями, мають розміри 1,5-2 мкм в довжину. Клітини розташовуються поодиноко або по два. Штам має джгутики. Малорухливий. Джгутики розташовані перетрихально. Капсул E.coli не утворюють [11].

Бактерії добре ростуть на простих поживних середовищах: м’ясопептонному бульйоні (МПБ), м'ясопептонному агарі (МПА). На МПБ дають помітний ріст зі значним помутнінням середовища; осад невеликий, сіруватого кольору, легко руйнується. Утворюють пристінкове кільце, плівки на поверхні бульйону зазвичай відсутня. На МПА колонії круглі, діаметр колоній 1,2- 2,5 мм, прозорі з сірувато-голубим відтінком, поверхня колоній гладенька, краї – рівні, структура – однорідна, консистенція – пастоподібна, легко емульгують (рис.4.1).

Рис. 4.1. Зовнішній вигляд колоній Escherichia coli М17/рColap після вирощувування на МПА.

На середовищі Ендо утворює червоні колонії з металевим блиском (рис 4.2). [11].

Рис. 4.2. Колонії E. coli М17/рColap на щільному середовищі Ендо.