Литература

1. Лыскина, Г. А. Слизисто-кожный лимфонодулярный синдром (синдром Кавасаки). Диагностика и лечение / Г. А. Лыскина. — Видар-М, 2008. — С. 139.

2. Kawasaki, T. Acute febril MCLNS: Clinical observations of 50 cases / T. Kawasaki // Jpn.J.Allergol. — 1967. — Vol. 16. — P. 178–222.

3. Брегель, Л. В. Болезнь Кавасаки у детей — первые клинические наблюдения в России / Л. В. Брегель, Ю. М. Белозеров, В. М. Субботин // Рос. вести перинатол. педиатр. — 1998. — Т. 43. — Р. 25–30.

УДК 57.085.22

ВОЗМОЖНОСТЬ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ПЕРЕЖИВАЮЩИХ СРЕЗОВ

ТОНКОЙ КИШКИ ДЛЯ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ НЕФРОТОКСИЧЕСКОГО

ДЕЙСТВИЯ СОЛЕЙ ТЯЖЕЛЫХ МЕТАЛЛОВ

Роганова Е. А.

Научные руководители: к.м.н., доцент Л. Г. Коваленко; н.с. Е. А. Потапов

«Одесский национальный медицинский университет»,

«Украинский НИИ медицины транспорта»

г. Одесса, Украина

Введение

Известно, что почки являются одним из основных органов-мишеней тяжелых металлов (ТМ) в организме животных и человека [1], а среди типичных нефротоксикантов особая роль принадлежит кадмию. Особый интерес к кадмию вызван его нахождением в периодической системе элементов в триаде цинк-кадмий-ртуть, что свидетельствует о близости его химических свойств к таковым у цинка, который необходим для нормальной жизнедеятельности организма. В то же время по токсичности Cd во многом близок ко ртути, что нашло отражение в общих подходах к диагностике, лечению, профилактике отравлений и металлопатий, вызванных этими глобальными экотоксикантами. По оценкам специалистов ежегодно в окружающую среду из антропогенных источников поступает около 25–30 тыс. т Cd. Причем, большой вклад в этот показатель (от 4 до 13 тыс. т в год)вносят добыча и сжигание ископаемого топлива [2]. Самым крупным источником воздействия Cd на население является сигаретный дым: каждая сигарета может содержать от 1 до 2 мкг Cd, и 40–60 %этого количества со вдыхаемым дымом обычно проходит через легочный эпителий в системный кровоток. В связи с высоким содержанием Cd в табаке его ретенция в организме курильщика увеличивается в 1,5–2 раза по сравнению с некурящими.

Среди некурящих основным источником Cd являются потребляемые в пищу продукты [2].

Как и многие другие ТМ, кадмий обладает выраженными кумулятивными свойствами и имеет отчетливую тенденцию к накоплению в организме [1]. Период его полувыведения составляет 10–35 лет. К 50-летнему возрасту человека общее содержание кадмия может достигать 30–50 мг. Главным «хранилищем» кадмия служат почки (30–60 % всего количества) и печень (20–25 %). Остальной кадмий находится в поджелудочной железе, селезенке, трубчатых костях, а также других органах и тканях.

Общеизвестно [4], что однослойный призматический эпителий тонкой кишки имеет значительное сходство с однослойным кубическим эпителием почечных канальцев. Для этого есть существенные основания. Выделительная система в процессе эмбриогенеза формируется из дивертикула первичной кишки и мезенхимальной бластемы. В связи с этим она отчасти сохраняет общий план строения, функционирования и регуляции, тесную взаимосвязь в норме и патологии, равно как и базовые положения развития патологического процесса. Сопоставив пищеварительную и мочевыделительную системы, можно отметить общую схему строения, наличие эпителия с щеточной каймой и со сходными транспортными системами, сходной регуляцией функции и пролиферации, общие физиологические и патологические процессы. Одной из оптимальных моделей, на наш взгляд, оказалась методика изолированных переживающих фрагментов тонкой кишки.

Учитывая тот факт, что прямое исследование влияния ксенобиотиков на эпителий почечных канальцев in vivo и in vitro технически очень сложно, мы заинтересовались возможностью экстраполирования результатов экспериментов на моделях с эпителием тонкого кишечника на процессы воздействия ксенобиотиков на эпителий почечных канальцев.

Материалы и методы

Работа выполнялась на базе Украинского НИИ медицины транспорта (отдел токсикологии). Исследования проведены на переживающих срезах тонкой кишки нелинейных белых крыс, находившихся на общевиварном рационе. Важной составляющей успеха данного эксперимента является состояние лабораторных животных и условия их содержания. Для эксперимента по результатам анализа крови и мочи были отобраны практически здоровые животные. За сутки до эксперимента животные находились без доступа к пище со свободным доступом к питьевой воде.

Суть эксперимента заключается в том, что у лабораторной крысы после декапитирования быстро (в течение 1–2 мин.) извлекают тонкий отдел кишечника, делят его на фрагменты и перфузируют раствором Рингера-Локка с рН 8. Такой раствор обеспечивает функционирование эпителиальной ткани выделенного переживающего фрагмента. Необходимо учитывать, что перфузия также влияет на эпителий тонкого кишечника и поэтому ее необходимо проводить очень осторожно, в щадящем режиме. На качество эксперимента большое влияние оказывает время, поэтому все предварительные манипуляции следует проводить максимально быстро, что обеспечивается слаженной командной работой исследователей, задействованных в эксперименте. Все фрагменты кишечника должны постоянно находиться в растворе Рингера-Локка с рН 8,0. На концы изолированных фрагментов накладываются лигатуры. В полость изолированного фрагмента кишечника вводят 1 мл раствора Рингера-Локка с растворенным в нем тестируемым веществом, в нашем случае это хлорид кадмия с концентрацией 0,5 мг/л (по металлу). В полость контрольного фрагмента вводится чистый раствор Рингера-Локка. Заполненные фрагменты помещают в раствор Рингера-Локка и выдерживают в термостате при температуре 37 °С в течение 30 мин. После завершения экспозиции содержимое фрагментов извлекают, 0,02 мл его помещают в пробирку с 0,05 мл изотонического раствора натрия хлорида, подкрашенного метиленовым синим. Растворы перемешивают и выдерживают при комнатной температуре 10 мин, а затем подсчитывают клетки эпителия кишечника и количество мигрировавших лейкоцитов в камере Горяева. Подсчет ведется в 100 больших квадратах. Количество эпителиальных клеток оценивается по формуле: Х = а × 4000 × 1,25/1600. Полученное число показывает количество клеток в одном мкл содержимого кишечника (таблица 1).

Таблица 1 — Количество эпителиальных клеток и лейкоцитов в просвете тонкой кишки после экспозиции in vitro CdCl₂ в концентрации 0,5 мг/л (контроль — раствор Рингера-Локка)

	Количество эпителиальных клеток на 100 квадратов	Количество лейкоцитов на 100 квадратов
Р-р Рингера	78 ± 5	94 ± 5
Хлорид кадмия	186 ± 21	153 ± 9

Вывод

Введение в просвет переживающего фрагмента тонкой кишки раствора CdCl₂вызывает увеличение миграции эпителиальных клеток и лейкоцитов, что свидетельствует о повреждающем действии соли кадмия на эпителий.